[发明专利]牦牛皮降血压胶原蛋白多肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种胶原蛋白多肽及其制备方法，更加具体地说，尤其涉及牦牛皮降血压多肽及其制备方法。 

背景技术

胶原蛋白肽通常是由胶原或明胶经过蛋白酶等降解处理得到的产物，含有的氨基酸和胶原的基本一致，特别是特征氨基酸羟脯氨酸。现代生物代谢的研究发现，通过一系列酶消化蛋白，可以形成一些小分子的物质，并被人体吸收。体内吸收不仅局限于游离氨基酸的形式，而且主要是以2-3个氨基酸组成的小肽形式直接吸收。抗高血压肽又被称为血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽。ACE抑制多肽是通过竞争性抑制作用，阻碍ACE的催化反应，与血管紧张素I相比，ACE抑制肽与ACE的结合能力更强，而且还不容易释放，从而阻碍ACE催化水解血管紧张素I成为血管紧张素Ⅱ的生化反应过程，发挥降低血压的作用。 

自从蛇毒中发现ACE抑制肽，已经有许多研究尝试合成ACE抑制多肽，如依那普利、阿拉普利和赖诺普利等，这些合成化合物被用来治疗人体的高血压和心力衰竭等疾病。但是合成的ACE抑制化合物一般都会有副作用，如咳嗽、味觉障碍、皮疹和血管神经性水肿等。因此，在最近10年，人们都在努力寻找天然来源的ACE抑制剂，尽管很少但是这些抑制剂是没有副作用的。 

牦牛是青藏高原地区的重要畜种，拥有顽强的生命力，生长环境是无污染、绿色纯天然的青藏高原。牦牛皮中含有人体必需的各种氨基酸、多种营养元素、二十多种对人体有益的矿物质。其化学成分主要由蛋白质、水、无机盐、脂类、色素及碳水化合物等组成，其中水分占60％-70％，蛋白质含量占到30％-40％，脂类的含量的百分比在2.0％-4.0％之间，无机盐含量为0.3％-1.0％，碳水化合物及其他占0.5％-1.5％。从牦牛皮中提取天然的胶原蛋白多肽，可拓宽牦牛皮产品的种类，从而充分利用牦牛皮的营养价值和功用，防止浪费，保护环境。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，对牦牛皮进行胶原蛋白提取，进行明胶的提取和复合酶解，获得具有降血压功效的胶原蛋白肽，扩展牦牛皮的应用前景。 

本发明的技术目的通过下述技术方案予以实现： 

本发明提供一种以牦牛皮为主原料的具有降血压功效的胶原蛋白多肽的制备方法，依据上述制备方法制备牦牛皮降血压胶原蛋白多肽，其工艺步骤包括物理及化学法对原料的预处理，明胶的制备，复合酶解制备ACE抑制胶原多肽，通过利用超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析和高效液相色谱等方法进行分离纯化多肽，浓缩干燥，具体步骤是： 

步骤1，牦牛皮的脱毛，即将牦牛皮置于水中清洗除去表面杂质，在剪去折干牦牛皮上的毛后在60～80℃温水中浸泡牦牛皮4～48h，机械彻底脱毛，清水冲洗，清除毛屑，将皮剪切成0.5×0.5cm的小块，得到脱毛的牦牛皮，置于-18～-20℃冷冻保存； 

步骤2，牦牛皮的脱脂，即将步骤1脱毛的牦牛皮置于5wt％～20wt％正丁醇的水溶液中(即在溶液中，正丁醇的质量百分数为5—20％)，在溶液温度为0～10℃下连续搅拌4～48h，得到脱脂的牦牛皮，所述步骤1脱毛的牦牛皮与正丁醇的水溶液的质量比为1：(5～20)； 

步骤3，牦牛皮的除杂蛋白，即将步骤2脱脂的牦牛皮置于碱液中，在0～10℃下连续搅拌5～48h，得到除杂蛋白的牦牛皮，其中所述碱液为0.01～0.2M的氢氧化钠水溶液或者氢氧化钾水溶液，所述步骤2脱脂的牦牛皮与碱液的质量比为1：(15～40)； 

步骤4，牦牛皮的脱酸，即将步骤3除杂蛋白的牦牛皮置于酸液中，在室温20—25℃搅拌浸泡2～15h，再反复水洗牦牛皮至pH值达到5～7，得到脱酸牦牛皮，其中所述酸液为质量百分数为0.01％～2％的盐酸水溶液或者硫酸水溶液，所述步骤3除杂蛋白的牦牛皮与酸液的质量比为1：(5～15)； 

步骤5，对脱酸牦牛皮进行抽提，即将步骤4脱酸的牦牛皮置于70～90℃的热水中搅拌抽提，所述步骤4脱酸的牦牛皮与热水的质量比为1：(5～15)，在搅拌抽提过程中每隔30～120min进行过滤并更换热水继续进行搅拌抽提，直至牦牛皮全部溶解，每次过滤得到的滤液汇总成为水抽提产物； 

步骤6，将水抽提产物制备明胶粉末，即将步骤5得到的水抽提产物(即牦牛皮全部溶解后得到的全部胶液)在4000～10000g离心力下离心2～20min，收集上清液，利用旋转蒸发仪进行浓缩后干燥得到明胶粉末，2～4℃储存备用；