[发明专利]油桐下胚轴愈伤组织诱导及高效再生植株的方法

权利要求书

1.油桐下胚轴愈伤组织诱导及高效再生植株的方法,其特征在于,包括以下步骤:

将油桐成熟胚在无菌条件下萌发30天的下胚轴,在无菌条件下切成长为0.5-1.0cm的小块,接种到WPM+5.0-10.0mg/L6-BA+1.0mg/L KT+0.1mg/L NAA的培养基中诱导愈伤组织,暗培养3天后,转到光照条件下培养10天；培养温度为26士1℃,光照强度为2100-2200lx,光照时间12-14h/d；然后经过不定芽分化、继代增殖、壮苗和生根培养获得完整植株；最后进行炼苗、移栽。

2.根据权利要求1所述的油桐下胚轴愈伤组织诱导及高效再生植株的方法,其特征在于,不定芽分化的具体过程如下:将下胚轴诱导的质地较好的愈伤组织接种到WPM+0.5-1.0mg/L6-BA+0.01-0.05mg/L NAA+2.0mg/L GA₃的培养基中进行不定芽的分化培养,暗培养1天后,转到光照条件下培养25-30天；培养温度为26士1℃,光照强度为2100-2200lx,光照时间12-14h/d。

3.根据权利要求1所述的油桐下胚轴愈伤组织诱导及高效再生植株的方法,其特征在于,继代增殖培养的具体过程如下:将愈伤组织分化培养得到的健壮不定芽切下接种到WPM+2.0-3.0mg/L KT+0.05mg/L IAA+2.0mg/L GA₃的培养基中进行不定芽的增殖培养,暗培养1天后,在光照条件下培养25-30天；培养温度为26士1℃,光照强度为2100-2200lx,光照时间12-14h/d。

4.根据权利要求1所述的油桐下胚轴愈伤组织诱导及高效再生植株的方法,其特征在于,壮苗培养的具体过程如下:将增殖培养得到的芽转接到WPM+0.5-1.0mg/L NAA+1.0-2.0mg/L GA₃的培养基中进行壮苗培养,暗培养1天后,在光照条件下培养15-20天；培养温度为26士1℃,光照强度为2100-2200lx,光照时间12-14h/d。

5.根据权利要求1所述的油桐下胚轴愈伤组织诱导及高效再生植株的方法,其特征在于,生根培养的具体过程如下:将壮苗培养获得2-4cm的苗接到1/4MS+0.1-0.3mg/L IBA的培养基中进行生根培养；培养温度为26士1℃,暗培养3-5天,再转到光照下培养5-7天即可生根,光照强度为2100-2200lx,光照时间12-14h/d。

6.根据权利要求1所述的油桐下胚轴愈伤组织诱导及高效再生植株的方法,其特征在于,炼苗、移栽的具体过程如下:

将生根后的苗先在人工气候箱中进行移栽前炼苗,炼苗保持空气相对湿度为80％以上,3-5天后从培养瓶中取出,洗净根部培养基,移栽到营养杯中,基质为泥炭土:珍珠岩:黄土＝2:1:1,用薄膜盖住营养杯口,保持恒定的气候条件,两周后取出薄膜,逐步进行正常水肥管理。

7.根据权利要求1-6任一项所述的油桐下胚轴愈伤组织诱导及高效再生植株的方法,其特征在于,不定芽分化的培养基为:WPM+1.0mg/L6-BA+0.01mg/L NAA+2.0mg/L GA₃。

8.根据权利要求1-6任一项所述的油桐下胚轴愈伤组织诱导及高效再生植株的方法,其特征在于,壮苗培养使用的培养基为:WPM+0.5-1.0mg/L NAA+2.0mg/L GA₃。

9.根据权利要求1所述的油桐下胚轴愈伤组织诱导及高效再生植株的方法,其特征在于,下胚轴的获得过程如下:

选取成熟的油桐当年生种子,取除种皮,将种仁用自来水冲洗5-8min,然后浸泡15-20h,中间换水3-4次,然后在超净工作台中用0.1％的HgCl₂消毒3-5min,用无菌水冲洗4-6次,接种在1/2MS基本培养基中,暗培养3-5天,再转到光照条件下培养20-30天即可使用下胚轴进行愈伤组织诱导；培养温度为26士1℃,光照强度为2100-2200lx,光照时间12-14h/d。

10.根据权利要求1所述的油桐下胚轴愈伤组织诱导及高效再生植株的方法,其特征在于,所述方法中用到的培养基均附加蔗糖30g/L,琼脂7g/L,pH调至5.4-5.8。