[发明专利]一种同时检测伊达比星及其β异构体杂质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学分析领域，具体涉及一种同时检测伊达比星及其β异构体杂质的方法。

背景技术

伊达比星是一种DNA嵌入剂，作用于拓扑异构酶II，从而抑制核酸合成。该化合物具有高亲脂性，与多柔比星和柔红霉素相比，细胞对药物的摄入增加。与柔红霉素相比，伊达比星具有更广的抗肿瘤谱，静脉或口服用药对鼠白血病和淋巴瘤更有效。

伊达比星侧链糖的连接方式存在两种可能，导致本品会以α和β两种构型存在，其中α为目标构型，用于临床。由于制备和贮存过程中会有β构型存在，因此产物中会混有一定含量的β异构体杂质。

伊达比星及伊达比星β异构体其结构式如下：

目前对伊达比星的检测方法是采用高效液相色谱法，一般高效液相分析异构体常用色谱柱为C18柱、OD-H柱、AD-H柱等。但是伊达比星样品采用C18柱、OD-H柱、AD-H柱均不能将伊达比星与伊达比星β异构体进行有效分离从而达到检测目的。

尚未见文献报道同时检测伊达比星与其β异构体杂质的方法。

发明内容

本发明公开了一种同时检测伊达比星及其中β异构体杂质的方法。

本发明的技术方案包括：将待测样品加入碳酸钾，再加入氯甲酸丙烯酯进行衍生化反应，得到反应产物再进行高效液相色谱分离、紫外检测、分别计算，即得。所述计算是采用本领域常规的峰面积归一法或外标法即可。

上述其中氯甲酸丙烯酯与伊达比星的摩尔比优选2:1～12:1，更优先的摩尔比为6:1～9:1。碳酸钾与伊达比星的摩尔比优选1.2:1～10:1。

其中衍生化反应在室温即可反应，也可以加热加速反应，温度优选10～50℃，反应时间优选0.5～20分钟。

更优选的衍生化反应条件为：氯甲酸丙烯酯与伊达比星的摩尔比为4:1～10:1，碳酸钾与伊达比星的摩尔比为3:1～5:1；衍生化反应温度为20～40℃，衍生化反应时间为0.5～5分钟。其中衍生化反应优选的反应溶剂是甲醇或乙醇。

高效液相色谱的条件优选：色谱柱是C18柱；流动相为磷酸二氢钠和四氢呋喃的混合液，两者体积比60～70:40～30；pH值为3.5～4.5。

每1000ml混合液中还优选含有十二烷基硫酸钠1.44g、磷酸1ml和N,N-二甲基辛胺1ml。

高效液相色谱更优选的条件是：色谱柱：柱长250mm×内径4.6mm×4-6μm，填料粒径为5μm，流动相为0.05M磷酸二氢钠-四氢呋喃＝65：35；pH值为4.0；所述流速为1ml/min；柱温为35℃；进样量是20μl。

紫外检测的波长优选254nm。

本发明方法适用于伊达比星或含有伊达比星的组合物；也适用于伊达比星的盐，比如说盐酸盐，硫酸盐、磷酸盐等，药学上可接受的盐均可，或者含有盐酸伊达比星盐的组合物；本方法还适用于伊达比星水合物或含有伊达比星水合物的组合物，均能有效分离检测伊达比星与其β异构体。对于含伊达比星的组合物既可以直接衍生化，也可以将伊达比星从组合物中提取出来后再衍生化，均是本发明衍生化后分离检测的保护范围。

以酰氯为氯甲酸丙烯酯为例，本发明衍生化反应的反应式如下：

加入水或者含水的缓冲溶液即可中止反应，反应产物稀释成适宜浓度供后续高效液相色谱分析和紫外检测。优选加入后续高效液相色谱法中的流动相来终止和稀释。

试验1：精密称取盐酸伊达比星供试品10mg，碳酸钾8mg，置10ml量瓶中，加入甲醇8ml，置30℃水中超声5min，使碳酸钾完全溶解，加入氯甲酸丙烯酯10mg，立即用甲醇稀释至刻度，振摇30秒，取一部分样品溶液用不加SDS的流动相稀释10倍，另一部分样品溶液不作任何处理，连续分析两次，通过考察样品溶液的稳定性，选择合适的处理方法。检验方法同实施例1(b)，结果见下表和附图3(从上至下分别为空白、不稀释0h，不稀释2h，稀释0h，稀释2h和β异构体对照品衍生化产物，表明衍生化产物不稀释(不加水终止反应)将迅速产生杂质伊达比星酮(约17.5min峰)等)。

这是因为流动相中的水使得衍生化反应终止。加入水或者含介质均可以终止。终止反应可以降低杂质伊达比星酮的增加，真实检出β异构体含量。