[发明专利]一种双膦酸类化合物的含量测定方法

说明书

技术领域

本发明属于化学制药的仪器分析领域，具体涉及一种双膦酸类化合物的含量测定方法。

背景技术

双膦酸盐类药物是一种重要的治疗骨质疏松症药物，其有效成分为双膦酸类化合物，口服或静脉注射给药，用于治疗骨质疏松症、变形性骨炎症、恶性肿瘤骨转移引起的高钙血症和骨痛等。

双膦酸类药物是破骨作用的强抑制剂，其中T_1/2：长达12年，作用非常持久。双膦酸类化合物能够牢固地吸附于骨的主要组成部分轻基磷灰石的表面，抑制其形成和溶解，还可抑制软组织的钙化和骨的吸收。迄今为止已经开发了“3代产品”，双膦酸类药物发展迅速，其抑制骨吸收和增加骨量疗效显著，且更易耐受，毒副作用小，被认为是目前最有发展前景，对骨吸收最强的抑制剂之一。

双膦酸类化合物由于其化合物性质特殊，在使用高效液相色谱法进行测定时，通常使用的以C18柱、紫外检测器为基础的反相色谱条件难以进行含量测定。本发明旨在提供一种高效、快捷的测定方法，准确测定双膦酸类化合物含量。

发明内容

本发明提供一种双膦酸类化合物的含量测定方法，该方法简单易行，便于操作。

本发明的技术解决方案如下：

一种双膦酸类化合物的含量测定方法，其特殊之处在于，所述测定方法是用高效液相色谱法测定含双膦酸类化合物的待测样品，得到待测样品主峰的峰面积，其中所用的流动相为无水甲酸水溶液，三乙胺调整pH值至3.4～3.6，无水甲酸与水的体积比为0.18～0.22/1000，用外标法计算待测样品中双膦酸类化合物的含量。

基于上述技术方案，本发明还做出以下优化和限定：

在该测定方法中，选用的色谱柱是阴离子交换树脂色谱柱，检测器是示差折光检测器；色谱柱的填料粒径为7μm，填料含有季铵盐基团，填料是以甲基丙烯酸酯为晶格的树脂。

在该测定方法中，配制的样品溶液和标准溶液配制的浓度均为1.6～2.4mg/ml，溶剂均为纯水。

上述流动相的流速为1.8-2.2ml/min，进样量为100μl。

上述色谱柱的柱温是32-38℃。

上述测定方法的测定时间是主峰保留时间的两倍，测定时间由高效液相色谱仪进样时刻开始计时。

上述无水甲酸与水的体积比为0.2/1000，无水甲酸水溶液的pH值为3.5，样品溶液和标准溶液配制的浓度均为2.0mg/ml，流动相的流速为2.0ml/min，色谱柱的柱温是35℃。

本发明的优点是：

1、具有较高好的选择性、灵敏度和准确度，且操作简便，测定快速，简单易行。

2、本发明中的流动相也可以用于液相色谱-质谱联用(LC-MS)的相关测定，对含双膦酸类化合物的样品中杂质的含量及相应分子结构进行测定。

3、本发明中的流动相，用可挥发盐做流动相，减少盐对于液相色谱管路的堵塞。

4、本发明具有较广的检测浓度范围，也具有较好的重复性和较高的精密度和准确度。

附图说明

图1：按照本发明的方法得到双膦酸类化合物阿仑膦酸钠的高效液相色谱图。

具体实施方式

本发明公开了一种双膦酸类化合物的含量测定方法，该方法是用高效液相色谱法测定含双膦酸类化合物的待测样品，得到待测样品主峰的峰面积，，选择高效液相色谱仪作为检测仪器；其中所用的流动相为无水甲酸水溶液，三乙胺调整pH值至3.4～3.6，无水甲酸与水的体积比为0.18～0.22/1000，优0.2/1000，用外标法计算待测样品中双膦酸类化合物的含量。本发明的测定时间是主峰保留时间的两倍，测定时间由高效液相色谱仪进样时刻开始计时，主峰保留时间即为出峰时间。其中，流动相的流速为1.8-2.2ml/min，优选2.0ml/min，进样量为100μl。本发明中的无水甲酸和三乙胺一般至少选用分析纯级的。

本发明选用的色谱柱是150×4.6mm的阴离子交换树脂色谱柱，检测器是示差折光检测器；色谱柱中填料的粒径为7μm，填料含有季铵盐基团，填料是以甲基丙烯酸酯为晶格的树脂；高效液相色谱法选用的检测器是示差折光检测器。色谱柱的柱温是32-38℃，优选35℃。

本发明中，配制的样品溶液和标准溶液配制的浓度均为1.6～2.4mg/ml，溶剂均为纯水，最好选用HPLC级的纯水。

配制样品溶液的过程是：精密称取双膦酸类化合物待测样品50.0±0.5mg，精密称定，置25ml容量瓶中，用纯水稀释至刻度，摇匀，备用。