[发明专利]1型糖尿病易感位点rs231775的检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201410331380.7 | 申请日： | 2014-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN104059989A | 公开（公告）日： | 2014-09-24 |
| 发明（设计）人： | 黄迅威;张天竹;沈玲宇;邵敏华 | 申请（专利权）人： | 光瀚健康咨询管理(上海)有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200000 上海市崇明县*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 糖尿病 易感位点 rs231775 检测 方法 试剂盒 | ||
1.一种1型糖尿病易感位点的检测方法，其特征在于：包括步骤：
(1)提取样品的基因组DNA，扩增样品的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)基因外显子中包含rs231775位点的区域，得到扩增产物；和
(2)使用高分辨熔解曲线(high-resolution melt，HRM)分析技术检测扩增产物中单核苷酸多态性(SNP)位点的基因型。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：CTLA-4基因的rs231775位点的基因型带有GG时，该CTLA-4基因所属样品的测试者对于1型糖尿病的易感性高于基因型未带有GG的测试者。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：使用特异性引物扩增样品的CTLA-4基因外显子中包含rs231775位点的区域，该特异性引物是指针对CTLA-4基因上rs231775号SNP位点而设计，能特异性扩增出包含上述SNP位点的DNA片段的引物对。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述特异性引物具有SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于：使用HRM分析技术直接检测扩增后包含上述SNP位点的DNA片段的引物对的基因型。
6.如权利要求3所述的方法，其特征在于：将扩增后包含上述SNP位点的DNA片段的引物对转移至分析装置，然后使用HRM分析技术对该引物对的基因型进行分析。
7.一种用于检测1型糖尿病易位点的试剂盒，其特征在于：对CTLA-4基因外显子中包含rs231775号位点的区域进行扩增及HRM技术分析。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括特异性扩增CTLA-4基因外显子中包含rs231775位点的区域的特异性引物。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述特异性引物具有SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：试剂盒的组分及含量包括5ul2X LightCycler480High Resolution Melting Master Mix、1.2ul25mM MgCl2溶液、1ul2μM Primer Mix、1ul5ng/μl左右DNA、1.8ul H2O、具有SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的特异性引物。
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