[发明专利]一种豇豆抗枯萎病的苗期鉴定方法

权利要求书

1.一种豇豆抗枯萎病的苗期鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、浸种催芽：以常用栽培豇豆品种为鉴定对象，挑选籽粒饱满的豇豆品种种子，用纱布包好，在55℃恒温水浴锅中温汤浸种2小时进行种子消毒，再将种子放在铺有吸水纸的培养皿中，最后用33℃恒温处理，直至得到萌发种子；

B、播种与幼苗培育：将萌发的种子播种于育苗基质上进行培养，得到二叶一心的幼苗；

C、豇豆枯萎病菌孢子悬浮液的制备：

a.选择豇豆枯萎病田间典型病株，在发病植株茎基部病健交界处切取2mm×2mm组织，用无菌水冲洗干净；

b.对上述组织用70％酒精消毒处理0.5min，再用0.1％的升汞溶液消毒0.5-1min，然后用无菌水冲洗3次，每次1min，得到消毒处理后的病组织；

c.将消毒处理后的病组织接入PDA平板上，置25℃恒温条件下培养；

d.当接种后的PDA平板培养基的表面即植物病组织周围长出菌落后，将该菌落转入PDA斜面培养基中，筛选得到鉴定豇豆枯萎病的指示菌即豇豆枯萎病菌(Fusarium oxysporum Schl.)JWS-1，送中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCC NO：M2014314；

e.从转入菌落的PDA斜面培养基中取豇豆枯萎病菌JWS-1，转入PDA平板培养基中，于25℃下恒温培养7天，得到培养好的豇豆枯萎病菌；

f.将培养好的豇豆枯萎病菌，每皿加10mL灭菌水，用灭菌的盖玻片刮取表面菌丝层，用三层纱布过滤得到分生孢子滤液，用血球计数板调整孢子浓度，得到豇豆枯萎病菌孢子悬浮液，孢子悬浮液浓度为3-7×10⁶个/mL，优选为5×10⁶个/mL。

D、病原菌侵染处理：

a.用铲子将二叶一心的豇豆幼苗从育苗培养基质中取出，轻轻抖动，进行清洗处理，无需人为伤根，得到自然伤根幼苗；

b.将自然伤根后的豇豆幼苗进行枯萎病菌的侵染处理；

E、发病调查：

分别于侵染处理后的10d、15d、20d、25d，调查侵染苗的发病状况，根据豇豆枯萎病病情分级标准确定0、1、3、5、7、9共6个发病等级，再根据该发病等级计算病情指数，最后根据该病情指数判断所述豇豆品种的豇豆枯萎病抗性分级；

其中：

步骤B中育苗基质为蛭石和干河沙，按重量比为1：10混匀，加福尔马林溶液或采用高温焖晒方法消毒。

步骤D的b步骤中的所述的侵染处理，是将自然伤根的豇豆幼苗放到枯萎病菌的孢子悬浮液中浸泡10min，取出后定植于装有灭菌培养基质的营养钵中，放置于塑料大棚中培养，控制温度为28±2℃，控制相对湿度为85％或以上。

2.一种分离的适用于豇豆枯萎病抗性鉴定的豇豆枯萎病菌(Fusarium oxysporum Schl.)JWS-1，保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：M2014314。

3.权利要求2所述的豇豆枯萎病菌(Fusarium oxysporum Schl.)JWS-1在豇豆枯萎病抗性鉴定中的应用。