[发明专利]一种豇豆抗枯萎病的苗期鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于园艺作物抗病性鉴定技术领域，具体涉及一种豇豆抗枯萎病的苗期鉴定方法，与作物抗病育种中抗性材料的早期快速鉴定技术领域有关。

背景技术

豇豆(学名Vigna unguiculata)俗称角豆、姜豆、带豆、挂豆角，属于豆科一年生植物，主要产于热带、亚热带和温带地区。豇豆在我国栽培历史悠久，种植分布面积广，除青海和西藏外，全国各省市区均有种植。近年来，我国豇豆种植面积维持在33万公顷以上。河北、河南、江苏、浙江、安徽、四川、重庆、湖北、湖南、广西等地每年栽培面积超过1万公顷，并形成了浙江丽水、江西丰城、湖北双柳等面积超过1000公顷的大型专业化豇豆生产基地。一般以春夏栽培为主，其次是秋季栽培。由于豇豆生长于高温湿热的环境，易诱发豇豆枯萎病的发生。

豇豆枯萎病菌(Fusarium oxysporum Schl.)以菌丝体和厚垣孢子随病残体遗落在土中越冬(种子也能带菌)，能在土中营长时间的腐生生活。病菌借助灌溉水、农具、施肥等传播，从伤口或根冠部侵入，在维管束组织的导管中繁殖，并向上扩展。豇豆枯萎病多数从开花期开始，结荚盛期可造成植株大量枯死。初期病株下部叶片先变黄，逐渐向上发展，病叶叶脉变褐，近脉的叶肉组织变黄，终致叶片干枯、脱落，病株易被拔起。检视根部及茎基部，根部变褐腐烂，根茎维管束变红褐色至黑褐色。严重危害时，全田植株死亡，仅剩枯藤一片，相当触目。

培育抗病品种是防治豇豆枯萎病的重要方法之一，抗性资源的获得对于抗病育种意义重大，客观、快速地评价豇豆品种枯萎病抗性的强弱是豇豆抗枯萎病育种过程中最基础、最重要的环节。目前豇豆枯萎病抗性鉴定主要是通过人工病圃鉴定和室内苗期鉴定。人工病圃鉴定被认为是最接近自然实际，最为可靠的抗性鉴定方法，在抗病育种过程中应用最为普遍。但此鉴定方法过于依赖自然发病条件，如果环境条件不适合发病或者病圃病菌分布不均匀，容易造成抗性误判，历时太长，且具有较强的季节性。豇豆苗期鉴定方法简便、迅速、容易控制外界环境条件。常用的方法为，剪根幼苗浸根法(方木壬等.豇豆枯萎病抗原筛选研究，华南农业大学学报，1984，5(4)：57-61.)、胚根法(张衍荣等.豇豆枯萎病抗病性鉴定技术研究，华南农业大学学报，2005，26(3)：22-25.)。其中胚根法发芽率与成苗生长势的差异常造成结果不一致，不能准确反映苗期的抗性，并且胚根接种到苗期显症的周期比较长。剪根幼苗浸根法，虽然周期较短，简便可行，但剪根长短易不均匀，且剪根费时费力。两种鉴定方法均有一定的缺点，这是造成苗期鉴定结果与人工病圃鉴定存在显著差异的原因之一。因此探索一套发病迅速、育苗时间短、管理简便、适合大批量育种材料的豇豆枯萎病抗性快速鉴定方法对于评价豇豆种植材料的抗病性、培育抗病新品种、进行合理品种布局具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种豇豆抗枯萎病的苗期接种鉴定方法。该方法简便易行，所需设备较少，结果可靠，能较为准确地反映不同豇豆品种对枯萎病的抗性表现。

实现本发明的技术方案为：

一种豇豆抗枯萎病的苗期接种鉴定方法，包括以下步骤：

A、豇豆种子催芽：

选择市售和常用栽培的豇豆品种作为鉴定对象；

挑选籽粒饱满的豇豆品种种子，用纱布包好，在55℃恒温水浴锅中温汤浸种2小时，进行种子消毒，再将种子放在铺有吸水纸的培养皿中，最后33℃恒温处理，直至得到萌发种子。

B、播种与幼苗培育：

将萌发的种子播种于育苗基质(简称基质，配方见后)，进行培养，得到二叶一心的幼苗。

C、豇豆枯萎病菌孢子悬浮液的制备：

a.选择豇豆枯萎病田间典型病株，在发病植株茎基部病健交界处切取2mm×2mm组织，用无菌水冲洗干净；

b.对上述组织进行消毒处理，用70％酒精消毒0.5min，再用0.1％的升汞溶液消毒0.5-1min，然后用无菌水冲洗3次，每次1min，得到消毒处理后的病组织；

c.将消毒处理后的病组织接入PDA平板上，置25℃恒温条件下培养；

d.当接种后的PDA平板培养基的表面即植物病组织周围长出菌落后，将该菌落转入PDA斜面培养基中(在4℃冰箱内贮存备用，或可长期应用)，筛选得到鉴定豇豆枯萎病的指示菌即豇豆枯萎病菌JWS-1，Fusarium oxysporum Schl.JWS-1，于2014年7月3日送中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCC NO：M2014314；