[发明专利]一种悬浮培养BHK-21细胞的无血清无动物源培养基及其配制方法有效
申请号: | 201410335070.2 | 申请日: | 2014-07-15 |
公开(公告)号: | CN105018416B | 公开(公告)日: | 2018-11-30 |
发明(设计)人: | 赵峻岭 | 申请(专利权)人: | 内蒙古金源康生物工程有限公司 |
主分类号: | C12N5/071 | 分类号: | C12N5/071 |
代理公司: | 北京中海智圣知识产权代理有限公司 11282 | 代理人: | 李大为 |
地址: | 010070 内蒙古自治*** | 国省代码: | 内蒙古;15 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 培养基 悬浮培养 细胞 动物源 无血清 水解物 血清 脂类 维生素 增殖 配制 低蛋白培养基 添加物 无机盐 生物学功能 负面作用 细胞活力 重组蛋白 组分优化 微量元素 低成本 高生长 规模化 氨基酸 抗原 倍增 替代 优化 | ||
1.一种悬浮培养BHK-21细胞的无血清无动物源培养基,其特征在于:包括氨基酸,无机盐,维生素,蛋白水解物,脂类和添加物;
所述氨基酸包括L-丙氨酸、L-谷氨酰胺、L-精氨酸盐酸盐、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-半胱氨酸一水合物、L-谷氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸二钠盐、L-缬氨酸、L-胱氨酸盐酸盐、L-组氨酸盐酸盐、L-赖氨酸和甘氨酸;
所述无机盐包括无水氯化钙、氯化钠、磷酸氢二钠、六水氯化镁、无水硫酸镁、氯化钾、一水磷酸二氢钠、七水合硫酸锌、九水合硝酸铁、亚硒酸钠、五水硫酸铜和硫酸亚铁;
所述维生素包括生物素、氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇、磷酸吡哆醛、核黄素、钴胺素、盐酸硫胺素和肌醇;
所述蛋白水解物包括酵母超滤物、棉籽水解物、大米水解物和麦麸水解物;
所述脂类包括亚油酸、大豆卵磷脂、胆固醇、腐胺和乙醇胺;
所述添加物包括D-葡萄糖、丙酮酸钠、硫辛酸、胸苷、腺嘌呤、胸腺嚓咤、重组胰岛素、柠檬酸铁、环庚三烯酚酮、酚红钠盐、F-68、碳酸氢钠、还原型谷胱甘肽和次黄嘌呤钠盐;
其中所述培养基中各种原料物质的含量分别为:
(1)氨基酸:
L-丙氨酸100-180mg/L,
L-谷氨酰胺200-300mg/L,
L-精氨酸盐酸盐200-300mg/L,
L-天冬氨酸100-150mg/L,
L-天冬酰胺300-450mg/L,
L-半胱氨酸一水合物10-50mg/L,
L-谷氨酸50-150mg/L,
L-异亮氨酸100-300mg/L,
L-亮氨酸100-150mg/L,
L-赖氨酸盐酸盐100-350mg/L,
L-蛋氨酸35-90mg/L,
L-苯丙氨酸10-60mg/L,
L-脯氨酸80-155mg/L,
L-丝氨酸100-200mg/L,
L-苏氨酸150-250mg/L,
L-色氨酸100-150mg/L,
L-酪氨酸二钠盐30-100mg/L,
L-缬氨酸100-185mg/L,
L-胱氨酸盐酸盐50-85mg/L,
L-组氨酸盐酸盐50-150mg/L,
L-赖氨酸50-500mg/L,
甘氨酸50-90mg/L,
(2)无机盐:
无水氯化钙100-150mg/L,
氯化钠5000-7500mg/L,
磷酸氢二钠10-45mg/L,
六水氯化镁50-80mg/L,
无水硫酸镁2-65mg/L,
氯化钾40-350mg/L,
一水磷酸二氢钠20-50mg/L,
七水合硫酸锌0.1-0.7mg/L,
九水合硝酸铁0.01-0.6mg/L,
亚硒酸钠0.01-0.03mg/L,
五水硫酸铜0.0001-0.003mg/L,
硫酸亚铁0.01-0.2mg/L
(3)维生素:
生物素0.005-0.01mg/L,
维生素C1-12mg/L,
氯化胆碱0.5-5mg/L,
D-泛酸钙0.2-2mg/L,
叶酸0.2-5mg/L,
烟酰胺5-8mg/L,
盐酸吡哆醇5-8mg/L,
磷酸吡哆醛0.06-0.3mg/L,
核黄素0.08-0.6mg/L,
钴胺素0.04-3mg/L,
盐酸硫胺素0.05-0.5mg/L,
肌醇5-8mg/L,
(4)脂类添加:
亚油酸0.1-0.3mg/L,
大豆卵磷脂15-20mg/L,
胆固醇6-10mg/L,
腐胺0.04-0.8mg/L,
乙醇胺1-30mg/L,
(5)水解物:
棉籽水解物500-4000mg/L,
酵母超滤物500-4000mg/L,
大米水解物500-2000mg/L,
麦麸水解物500-4000mg/L,
(6)其余添加物:
D-葡萄糖3000-6000mg/L,
丙酮酸钠100-250mg/L,
硫辛酸0.05-0.6mg/L,
胸苷0.06-0.5mg/L,
腺嘌呤0.1-5mg/L,
胸腺嘧啶0.02-2mg/L,
重组胰岛素3-25mg/L,
柠檬酸铁0.02-1mg/L,
环庚三烯酚酮0.1-8mg/L,
酚红钠盐6-15mg/L,
F-6850-600mg/L,
碳酸氢钠1200-2200mg/L,
还原型谷胱甘肽0.01-0.9mg/L,
次黄嘌呤钠盐0.1-5mg/L。
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