[发明专利]一种悬浮培养BHK-21细胞的无血清无动物源培养基及其配制方法有效

专利信息
申请号: 201410335070.2 申请日: 2014-07-15
公开(公告)号: CN105018416B 公开(公告)日: 2018-11-30
发明(设计)人: 赵峻岭 申请(专利权)人: 内蒙古金源康生物工程有限公司
主分类号: C12N5/071 分类号: C12N5/071
代理公司: 北京中海智圣知识产权代理有限公司 11282 代理人: 李大为
地址: 010070 内蒙古自治*** 国省代码: 内蒙古;15
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摘要:
搜索关键词: 培养基 悬浮培养 细胞 动物源 无血清 水解物 血清 脂类 维生素 增殖 配制 低蛋白培养基 添加物 无机盐 生物学功能 负面作用 细胞活力 重组蛋白 组分优化 微量元素 低成本 高生长 规模化 氨基酸 抗原 倍增 替代 优化
【权利要求书】:

1.一种悬浮培养BHK-21细胞的无血清无动物源培养基,其特征在于:包括氨基酸,无机盐,维生素,蛋白水解物,脂类和添加物;

所述氨基酸包括L-丙氨酸、L-谷氨酰胺、L-精氨酸盐酸盐、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-半胱氨酸一水合物、L-谷氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸二钠盐、L-缬氨酸、L-胱氨酸盐酸盐、L-组氨酸盐酸盐、L-赖氨酸和甘氨酸;

所述无机盐包括无水氯化钙、氯化钠、磷酸氢二钠、六水氯化镁、无水硫酸镁、氯化钾、一水磷酸二氢钠、七水合硫酸锌、九水合硝酸铁、亚硒酸钠、五水硫酸铜和硫酸亚铁;

所述维生素包括生物素、氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇、磷酸吡哆醛、核黄素、钴胺素、盐酸硫胺素和肌醇;

所述蛋白水解物包括酵母超滤物、棉籽水解物、大米水解物和麦麸水解物;

所述脂类包括亚油酸、大豆卵磷脂、胆固醇、腐胺和乙醇胺;

所述添加物包括D-葡萄糖、丙酮酸钠、硫辛酸、胸苷、腺嘌呤、胸腺嚓咤、重组胰岛素、柠檬酸铁、环庚三烯酚酮、酚红钠盐、F-68、碳酸氢钠、还原型谷胱甘肽和次黄嘌呤钠盐;

其中所述培养基中各种原料物质的含量分别为:

(1)氨基酸:

L-丙氨酸100-180mg/L,

L-谷氨酰胺200-300mg/L,

L-精氨酸盐酸盐200-300mg/L,

L-天冬氨酸100-150mg/L,

L-天冬酰胺300-450mg/L,

L-半胱氨酸一水合物10-50mg/L,

L-谷氨酸50-150mg/L,

L-异亮氨酸100-300mg/L,

L-亮氨酸100-150mg/L,

L-赖氨酸盐酸盐100-350mg/L,

L-蛋氨酸35-90mg/L,

L-苯丙氨酸10-60mg/L,

L-脯氨酸80-155mg/L,

L-丝氨酸100-200mg/L,

L-苏氨酸150-250mg/L,

L-色氨酸100-150mg/L,

L-酪氨酸二钠盐30-100mg/L,

L-缬氨酸100-185mg/L,

L-胱氨酸盐酸盐50-85mg/L,

L-组氨酸盐酸盐50-150mg/L,

L-赖氨酸50-500mg/L,

甘氨酸50-90mg/L,

(2)无机盐:

无水氯化钙100-150mg/L,

氯化钠5000-7500mg/L,

磷酸氢二钠10-45mg/L,

六水氯化镁50-80mg/L,

无水硫酸镁2-65mg/L,

氯化钾40-350mg/L,

一水磷酸二氢钠20-50mg/L,

七水合硫酸锌0.1-0.7mg/L,

九水合硝酸铁0.01-0.6mg/L,

亚硒酸钠0.01-0.03mg/L,

五水硫酸铜0.0001-0.003mg/L,

硫酸亚铁0.01-0.2mg/L

(3)维生素:

生物素0.005-0.01mg/L,

维生素C1-12mg/L,

氯化胆碱0.5-5mg/L,

D-泛酸钙0.2-2mg/L,

叶酸0.2-5mg/L,

烟酰胺5-8mg/L,

盐酸吡哆醇5-8mg/L,

磷酸吡哆醛0.06-0.3mg/L,

核黄素0.08-0.6mg/L,

钴胺素0.04-3mg/L,

盐酸硫胺素0.05-0.5mg/L,

肌醇5-8mg/L,

(4)脂类添加:

亚油酸0.1-0.3mg/L,

大豆卵磷脂15-20mg/L,

胆固醇6-10mg/L,

腐胺0.04-0.8mg/L,

乙醇胺1-30mg/L,

(5)水解物:

棉籽水解物500-4000mg/L,

酵母超滤物500-4000mg/L,

大米水解物500-2000mg/L,

麦麸水解物500-4000mg/L,

(6)其余添加物:

D-葡萄糖3000-6000mg/L,

丙酮酸钠100-250mg/L,

硫辛酸0.05-0.6mg/L,

胸苷0.06-0.5mg/L,

腺嘌呤0.1-5mg/L,

胸腺嘧啶0.02-2mg/L,

重组胰岛素3-25mg/L,

柠檬酸铁0.02-1mg/L,

环庚三烯酚酮0.1-8mg/L,

酚红钠盐6-15mg/L,

F-6850-600mg/L,

碳酸氢钠1200-2200mg/L,

还原型谷胱甘肽0.01-0.9mg/L,

次黄嘌呤钠盐0.1-5mg/L。

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