[发明专利]一种高效提取深层液态发酵生产桦褐孔菌菌丝体多糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体是一种高效提取深层液态发酵生产桦褐孔菌菌丝体多糖的方法。

背景技术

桦褐孔菌又名白桦茸，属担子菌亚门、层菌纲、非褐菌目、多孔菌科、褐卧孔菌属，是一种生于桦树上的寄生性大型药用真菌。其子实体呈现类似于碳的黑色块状形态，主要分布于北美北部、俄罗斯、芬兰、中国黑龙江、日本北海道等地区的珍稀药用菌类

桦褐孔菌主要寄生于白桦、榆树、银桦等其他桦木类的树皮下，子实体即菌核表面黑色深裂，菌管前段开裂，菌肉木栓质且具有环纹，孢子椭圆状或卵状，是一种生在在寒带的木腐菌。桦褐孔菌在俄罗斯等地被广泛应用,是一种俄罗斯民间常用药物,已有至少数百年的应用历史，因其在治疗肠胃疾病、缓解癌症症状、预防疾病等方面效果显著,在俄罗斯、中欧、我国东北等地区应用广泛，广受认可，被当地人称为“万能药”。

随着现代生物技术的发展,研究者发现桦褐孔菌的多糖可能是其主要药效成分,目前已经报道的桦褐孔菌多糖药理作用主要包括抗肿瘤、抗病毒、降血糖、降血脂、清除自由基、抑制过氧化脂质生成、抗炎、增强免疫力、抗凝血、抗衰老、止痛等。据报道，桦褐孔菌的抗肿瘤作用主要通过葡聚糖等多糖类物质来激活机体的免疫系统，起到增强机体的抗肿瘤免疫的作用。在治疗肿瘤方面，血清中较高浓度的一氧化氮含量能够影响肿瘤细胞信号的传导和肿瘤内血管的形成，促进肿瘤生长。桦褐孔菌多糖对小鼠肉瘤的生长具有明显的抑制作用。桦褐孔菌多糖降血糖、降血脂作用的研究表明，桦褐孔菌多糖能够促进胆固醇逆向代谢转换为胆固醇酯，抑制肠道内胆固醇吸收，同时能够改善血管内皮功能，降低血脂。桦褐孔菌中多糖类物质具有免疫增强功能，对免疫相关淋巴细胞的活性和功能有促进作用，能够清除体内自由基，延长细胞分裂，延长细胞寿命。

目前国内已有少数院校展开深层液态发酵生产桦褐孔菌的研究，都是以获得桦褐孔菌的菌丝体为主要目标展开研究的，而目前国内关于液态发酵生产桦褐孔菌的功效成分多糖的相关报道很少。目前关于真菌类原料多糖的提取工艺多为传统的水提醇沉法，即向干燥后的菌丝体加入8-20倍重量的水，控制温度80-100℃浸泡2-4h，静止1-2h，然后反复浸提2-3次，然后合并上清液进行浓缩，再用50-85％的酒精进行醇沉，最终烘干即可得到粗多糖。此工艺的缺点是需加入大量水长时间进行浸提，并且为提高收率需反复浸提2-3次，操作周期较长、劳动强度偏大，并且多糖的提取收率多在2-3％，产品成本比较昂贵。并且分离的上清液作为废液直接弃液排掉，增加了治污成本。

发明内容

本发明的目的是为了解决传统多糖的水提醇沉的技术瓶颈，采用此发明能够快速、高效生产出桦褐孔菌多糖。

为了实现上述目的，本发明主要按照下述步骤进行：

本发明的高效提取深层液态发酵生产桦褐孔菌菌丝体多糖的方法包括下述步骤：

1)分离：将桦褐孔菌发酵液经分离，得到桦褐孔菌上清液和湿菌丝体；

2)超声处理：向步骤1)所得的湿菌丝体中加入步骤1)所得2-5倍质量的桦褐孔菌上清液进行稀释，搅拌均匀后进行超声处理10-40min，得到超声处理液；上清液的添加主要是作为水溶性溶液来进行提取菌丝体中的多糖，添加量偏少，提取不完全，收率偏低，并且在超声过程中容易温度偏高，影响设备使用；若添加过多，后期处理需消耗大量的能源，成本偏高；

3)复合酶解：将步骤2)所得超声处理液调节pH值为4-7，控制温度30-70℃，然后向其加入相当于干菌丝体重量0.2-3％的纤维素酶、0.2-3％的蛋白酶，进行酶解1-4h，得到酶解液；

4)分离、浓缩：将步骤3)所得的酶解液进行分离，将分离所得到的上清液经低温浓缩，得到浓缩比重为1.25～1.40(50℃热测)的浓缩浆；

5)醇沉、烘干：加入浓缩浆重量3-5倍量的95％酒精，至混合液酒精度为65-80％(v/v)，静置2-6h，将沉淀物进行真空烘干；烘干至干燥物水分含量为3～8％，即得菌丝体多糖提取物。

其中，步骤1)、4)所述的分离为离心分离，采用三足离心机或高速离心机等离心设备进行，转速为1500-5000rpm。

步骤2)超声所用的设备为超声波细胞粉碎机，其他同等超声设备均可；超声的功率为0.5-2.5kw。

步骤3)所述的纤维素酶的单位酶活为15000μ/g～25000μ/g，所述的蛋白酶的单位酶活为47000μ/g～53000μ/g。

所述的低温浓缩过程均要求控制温度不高于75℃，真空度不低于0.085Mpa。