[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的肽适配子文库构建方法

权利要求书

1.一种基于双分子荧光互补技术的肽适配子文库构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）根据实验设计，合成包含TrxA-MCS-TrxA的核苷酸序列；TrxA-MCS-TrxA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

2）应用设计引物，以合成的TrxA-MCS-TrxA为模板，对合成序列进行高保真PCR扩增；

3）利用酶切连接方法将TrxA-MCS-TrxA转移入载体pBiFc-VC155双荧光互补表达载体，获得载体pBiFc-VC155-TrxA-MCS-TrxA；

4) 设计11个氨基酸的随机对应核苷酸序列，并通过酶切连接方法，插入pBiFc-VC155-TrxA-MCS-TrxA载体的多克隆位点中；转化细菌后，抽提质粒进行测序确认获得肽适配子文库。

2.根据权利要求1所述的一种基于双分子荧光互补技术的肽适配子文库构建方法，其特征在于：所述的载体包含随机的11个氨基酸及其多种组合排列，且随机的氨基酸被固定于细菌硫氧还蛋白TrxA的支架中，具有稳定的构象，且该表达片段和VENUS蛋白C155片段融合表达。

3.根据权利要求1所述的一种基于双分子荧光互补技术的肽适配子文库构建方法，其特征在于：将连接获取的载体转化感受态细胞，并涂布于氨苄青霉素抗性LB平板。

4.根据权利要求3所述的一种基于双分子荧光互补技术的肽适配子文库构建方法，其特征在于：对平板上的克隆进行摇菌，并提取质粒，通过酶切和菌液PCR对克隆进行鉴定。

5.根据权利要求4所述的一种基于双分子荧光互补技术的肽适配子文库构建方法，其特征在于：将阳性克隆送生物技术服务公司进行测序和分析。

6.一种如权利要求1所述的方法构建获得的肽适配子文库。

7.根据权利要求6所述的肽适配子文库，其特征在于：该文库能够表达11个随机氨基酸，且这些随机氨基酸通过TrxA蛋白支架形成稳定的构象，所述出发载体为pBiFc-VC155。

8.一种如权利要求6所述的肽适配子文库的应用，其特征在于：用于蛋白分子靶标或肽段靶标的筛选。