[发明专利]多价B群脑膜炎球菌蛋白疫苗及其制备方法

权利要求书

1.多价B群脑膜炎球菌蛋白疫苗，其特征在于，所述疫苗是由来自于B群脑膜炎球菌CMCC29356株、CMCC29361株、保藏编号为CGMCC No.8982的xrsw341215株和保藏编号为CGMCC No.8981的xrsw210902株的菌体OMV蛋白组成的多价联合疫苗，任选含有药用赋形剂和/或佐剂。

2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗是由来自于4株B群脑膜炎球菌的OMV蛋白按等重量份混合组成。

3.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗为液体剂型或冻干剂型。

4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗为液体剂型，任选含有铝佐剂；所述铝佐剂包括但不限于氢氧化铝、磷酸铝或硫酸铝。

5.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗为冻干剂型，任选含有赋形剂，所述赋形剂包括但不限于乳糖、蔗糖、明胶、山梨醇或人血白蛋白；用于稀释疫苗的稀释液是磷酸盐缓冲生理盐水、生理盐水，或含有铝佐剂的缓冲液或生理盐水，其中，每毫升稀释液中铝含量为0.05-0.2mg。

6.权利要求1-5任一项所述疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)分别对各B群脑膜炎球菌菌株进行种子培养，并连续传代至第4或5代进行发酵罐培养，待细菌生长至对数生长期后期或静止期前期，终止培养，离心收集菌体；

2)OMV蛋白溶出：用生理盐水或pH6-8.8的磷酸盐缓冲生理盐水洗涤并离心收获菌体，向菌体中加入提取液溶出OMV蛋白，离心收集上清液；

3)OMV蛋白纯化：将步骤2)的上清液用冷乙醇分步沉淀，离心收集沉淀，用注射用水复溶后加硫酸铵分步沉淀，再用注射用水溶解后加入脱氧胆酸钠解聚，然后进行超滤，收集浓缩液，用三氯醋酸沉淀，离心收集沉淀，用水溶解后超滤浓缩；然后依次进行离子交换层析、疏水层析、G25凝胶层析和分子筛层析，收集样品，除菌过滤后即得OMV蛋白原液；

4)测定各菌株OMV蛋白原液中的蛋白含量，按比例混合后即得；

其中，步骤2)中使用的提取液为0.5-1.5M的NaCl溶液，或0.1-0.8M的氯化锂-醋酸钠溶液。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤3)具体为：向步骤2)的上清液中加入冷乙醇至终浓度55-75％，离心收集沉淀，用注射用水复溶，加15-65％硫酸铵分步沉淀，分别收获上清或沉淀物，经注射用水复溶，用注射用水溶解后加入脱氧胆酸钠至终浓度0.2-1.0％，振荡后进行超滤，收集浓缩液，加入三氯醋酸至终浓度0.2-3.0％，离心收集沉淀，用水溶解后超滤浓缩；然后依次进行离子交换层析、疏水层析、G25凝胶层析和分子筛层析，收集样品，除菌过滤后即得OMV蛋白原液。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述离子交换层析包括阳离子交换层析和阴离子交换层析。

9.脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningococcus)xrsw341215株，其保藏编号为CGMCC No.8982。

10.脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningococcus)xrsw210902株，其保藏编号为CGMCC No.8981。