[发明专利]多价B群脑膜炎球菌蛋白疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及脑膜炎球菌疫苗及其制备方法，具体地说，涉及多价B群脑膜炎球菌蛋白疫苗及其制备方法。 

背景技术

脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningococcus，Nm)感染所致的流行性脑脊髓膜炎(流脑)，是一种世界范围内致病的急性呼吸道传染病，至今仍严重危害着人类健康，尤其是儿童。Nm根据其荚膜多糖结构的差异可分成13个血清群，且所有血清群均可致病。其中A、B、C、Y、W135群Nm所致疾病约占Nm疾病的95％以上。 

基于A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖和多糖-蛋白结合的各种单价(A或C)、双价(A、C)和四价(ACYW135)疫苗，在预防侵袭性疾病、控制疾病流行和爆发中起到了十分关键的作用和理想效果，有效地控制了疫苗型疾病的发生。 

而B群脑膜炎球菌荚膜多糖，由于其包含了与人类抗原潜在交叉免疫的表位，致使其免疫原性很弱，且能诱发自身免疫病，因此，以B群Nm荚膜多糖为免疫原的疫苗研究遇到了严重挑战。 

目前国际上针对B群Nm疫苗的研究主要采用二种策略，一种是基于外膜蛋白的外膜囊泡(Outer Menbrane Vesicle OMV)疫苗，即针对某些特定流行菌株的克隆群；另一种是基于反向疫苗学技术的重组蛋白疫苗。 

上世纪70年代，美国Zollinger、Frasch等首先报道了B群脑膜炎球菌外膜囊泡(OMV)疫苗的研究。随后分别有三种代表性OMV疫苗问世。 

1986年，巴西、古巴等南美国家B群流脑开始流行，基于古巴流 行B群脑膜炎球菌Cu385/83菌株(B4:P1.19,15)，古巴Finlay研究所研制出VA-MENGOC-BC疫苗，含B群OMV、C群CPS(荚膜多糖)、AL(OH)₃佐剂。1989年获得生产许可，1991年纳入免疫规划，已累计接种5500万剂次。 

1991年，挪威公共卫生研究所(Norwegian Institute of Public Health，NIPH)采用流行的B群脑膜炎球菌44/76-SL(B15:P1.7,16)为疫苗株，研制出MenBvacTM B群OMV疫苗，后转让给凯龙(Chiron)公司，并开始研制及规模化生产。 

1991年，新西兰出现B群流脑流行，并基于2004-2008年间爆发疾病分离株NZ98/254(CC41/44,B4:P1.7-2.4)研制出B群脑膜炎球菌疫苗MeNZB。 

反向疫苗学技术主要通过基因重组表达技术，分别克隆表达出fHbp、NadA和NHBA三种蛋白作为B群Nm蛋白疫苗的候选成分。目前国际上已有两种通过反向疫苗学技术研发的B群流脑蛋白疫苗，分别是诺华公司的4C MenB(Bexsero)和辉瑞公司的bivalent fHBp(r-fHBp)。 

4C MenB(Bexsero)含有FHbp1型蛋白、NadA蛋白和NHBA蛋白，之后又加入新西兰B群OMV疫苗(MeNZB)。 

Bivalent fHBP(r-fHBP)是含有fHbp1型和3型的双价蛋白疫苗。 

另外，惠氏公司的rLP2086疫苗，含有单一脂蛋白(rLP2086)的两种重组的脂蛋白LP2086，即两种fHBp重组脂蛋白Subfamily A，variant A05和Subfamily B variant01，也是4C MenB的一个组分，试验结果同样显示能诱导出杀菌抗体。 

其他的报道，例如Bruge等曾将纯化B群Nm荚膜多糖中的乙酰基团用丙酰基团取代，再与载体蛋白结合而制备多糖-蛋白结合疫苗，尽管试验证明该疫苗安全性良好，但诱导的抗体无功能活性。 

由于不同国家、地区B群流脑流行血清型别、亚型具有明显的地 域特征，至今为止开发的OMV疫苗不具有通用性。因而，对于B群流脑OMV疫苗的研发，选择适合本地区疾病发病特征的菌株尤为重要。 

欧洲地区B群Nm以ST-41/44clonal complex(CC.克隆群)血清型15型为主，美洲和大洋洲B群Nm以ST-8CC、ST-11CC和ST-32CC血清型4型为主。我国流脑监测和Nm分子流行病学研究发现，我国B群流行菌型与国外B群流行型别不同，主要以ST-4821CC血清型3型为主，并在健康人群中大量定植。 

古巴、挪威、新西兰等国根据本国主要流行的B群流脑优势致病株作为疫苗株“定制”的B群Nm OMV疫苗，所用菌株如下：