[发明专利]一种受转录和转录后双调控的溶瘤腺病毒及其构建方法

说明书

本发明属生物医学领域，涉及溶瘤腺病毒，具体涉及一种受组织或细胞特异性启动子(转录水平)和microRNA(转录后水平)双调控的新型溶瘤腺病毒及其构建方法，构建的双调控溶瘤腺病毒比仅受组织或细胞特异性启动子调控的溶瘤腺病毒更加安全、有效；本发明构建的双调控溶瘤腺病毒能单独使用或与现有的肿瘤治疗方法结合使用，能显著提高肿瘤治疗效果并减少副作用。

技术领域

本发明属生物医学领域，涉及溶瘤腺病毒，具体涉及一种受组织或细胞特异性启动子(转录水平)和microRNA(转录后水平)双调控的新型溶瘤腺病毒及其构建方法，按此方法构建的双调控溶瘤腺病毒比仅受组织或细胞特异性启动子调控的溶瘤腺病毒更加安全、有效。

背景技术

据报道，生物治疗是继手术、放疗、化疗三大传统疗法之后治疗癌症的第四种疗法，其主要包括免疫治疗、细胞治疗与基因治疗等。有关肿瘤生物治疗的研究与应用已经取得较多成果，其中，条件复制型腺病毒可以在肿瘤细胞内选择性的复制，而且具有显著的“溶瘤效应”和“旁观者效应”，因而作为一种新兴方式被期望在晚期癌症的治疗中发挥作用。目前最常用的构建条件复制型腺病毒的手段是利用人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控腺病毒早期复制必需基因(E1A)，实现其仅在肿瘤细胞内特异性复制和溶瘤的作用，以保证其治疗效应的安全性及有效性。然而，必须清楚地认识到，所述的安全性是相对的，尤其在高浓度病毒剂量的使用下，仍会产生比较严重的毒副作用，Kumiko Sugio等用人端粒酶启动子调控E1A早期复制的腺病毒TRAD以10moi和2moi剂量分别感染人肺成纤维细胞WI38,结果发现，在2moi小剂量情况下，病毒复制量很少，而在10moi剂量下，病毒复制量有500倍的增加；John Nemunaitis得出同样的结果；究其原因，均为腺病毒E1A基因的表达不够严谨所导致。研究者认为，如果能够在E1A mRNA的翻译水平可根据细胞不同活性进行更精细地调控，使其E1A基因表达经转录水平和转录后水平双重调控，则构建的这种新型条件复制型腺病毒，其严谨性必应得以增强，更为安全。近年来，MicroRNA是一类研究透彻的转录后基因表达调控分子，在肿瘤细胞和正常细胞中存在差异表达，它们是内源表达的小编码RNAs,通常只有18-25个核苷酸长度，是转录后基因表达的重要调控子,通过形成RNA诱导沉默复合体(RISC,RNA-induced silencing complex),和目的mRNA部分碱基完全互补配对结合，沉默靶基因；miR-145是其中研究众多、也最为清楚的microRNA，在很多肿瘤中包括结肠癌、肺癌、胃癌、卵巢癌组织和细胞系中表达量是低的，而在它们的正常细胞中表达量较高。本申请的前期研究曾成功构建了一个人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控腺病毒复制早期必需基因E1A的腺病毒Adzq11，其能很好地在肿瘤细胞内选择性复制。

在此基础上，本申请的发明人拟构建一种新的病毒Adzq11-145T。

与本发明相关的现有技术有如下参考文献：

1.Wei Fang,Wang Hui-ping,Chen Xia-fang,et al.Construction andcharacterization of oncolytic adenovirus controlled under heat shock protein70 gene promoter[J].Prog.biochem.biophys,2009,36(12):1536-1543

2.Sugio K,Sakurai F,Katayama K,et al.Enhanced safety profiles of thetelomerase-specific replication-competent adenovirus by incorporation ofnormal cell-specific microRNA-targeted sequences[J].Clin Cancer Res,2011,17(9):2807-2818