[发明专利]一种环糊精酯化衍生物、制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于水包油佐剂技术领域，具体涉及一种环糊精酯化衍生物、制备方法及其应用。

背景技术

目前油乳剂疫苗有三种剂型：油包水(W/O)型、水包油包水(W/O/W)型和水包油(O/W)型。W/O剂型免疫活性最强，但毒副反应大、注射困难；W/O/W免疫活性也较强，但热稳定性差、保存期短；O/W剂型毒副作用小、使用方便、热稳定性好，但是免疫活性较弱。MF59是首个实现商品化应用的O/W剂型佐剂，用其制备的人用流感疫苗在欧洲和美国获得上市。该佐剂的油为角鲨烯，具有安全、毒副作用极小等优点，表面活性剂为吐温和司本系列产品。但是，该佐剂的免疫活性相对较弱，仅能协助诱导微弱的免疫应答，尚不能满足养兽用疫苗的质量要求。另外，角鲨烯(或其类似物角鲨烷)的价格昂贵，也很难在兽用疫苗产品中广泛应用。法国SEPPIC公司用白油替代角鲨烯，用吐温和司本系列产品作为表面活性剂开发了一种O/W佐剂(ISA15A VG)，免疫活性也较弱。

发明内容

本发明的目的是提供一种环糊精酯化衍生物，采用该环糊精酯化衍生物制备的水包油型佐剂，具有良好的热稳定性和离心稳定性，能显著增提高抗原免疫活性。

本发明的另一目的是提供环糊精酯化衍生物的制备方法，该方法简单，硫酸根的取代度低，月桂酰基的取代度高，收率高。

本发明的再一目的是提供水包油型佐剂，稳定性好，能显著增提高抗原免疫活性。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

一种环糊精酯化衍生物，是由环糊精经月桂酰氯酯化和硫酸酯化后得到。

在本发明中，所述环糊精酯化衍生物中硫酸根的取代度为1.2-1.5，月桂酰基的取代度为1.3-1.7；所述环糊精为β环糊精。

本发明还提供所述环糊精酯化衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)环糊精与酰氯进行酯化反应；(2)步骤(1)反应后得到的混合物与氯磺酸进行酯化反应；(3)取步骤(2)反应后得到的混合物，调节pH至6.8-7.2，除去溶剂，取沉淀溶解、透析、干燥后得到环糊精酯化衍生物。

在本发明中，步骤(1)所述环糊精与酰氯进行酯化反应的方法为：在溶剂中，月桂酰氯与环糊精在55～80℃条件下进行酯化反应，所述溶剂为二甲基甲酰胺与吡啶的混合物。

在本发明中，步骤(2)的具体方法为：在步骤(1)反应后得到的混合物中加入氯磺酸，在55～80℃下反应。

在本发明中，月桂酰氯与环糊精的摩尔比为(1～4):1；氯磺酸与环糊精的摩尔比为(0.5～2.0):1。优选的技术方案中，所述的月桂酰氯与环糊精的摩尔比为(3.2-3.8):1，氯磺酸与环糊精的摩尔比为(0.8-1.2):1；步骤(1)和(2)的反应温度为55-65℃。

本发明还提供一种水包油型佐剂，包括所述环糊精酯化衍生物。

优选的技术方案中，所述水包油型佐剂，其特征在于由如下成分组成：

本发明还提供一种兽用疫苗，包括抗原和所述水包油型佐剂；所述疫苗为猪圆环病毒疫苗。

本发明环糊精酯化衍生物，硫酸根的取代度低，月桂酰基的取代度高，同时具有亲水和亲油基团，具备双亲功能。采用该环糊精酯化衍生物制备的水包油型佐剂，具有良好的热稳定性和离心稳定性，能显著增提高抗原免疫活性。

本发明采用月桂酰氯对环糊精进行酯化反应，然后采用硫酸酯化法(用氯磺酸进行磺化)，制备了环糊精酯化衍生物。本发明方法简单，收率高。

本发明水包油型佐剂，热稳定性和离心稳定性均合格，能显著提高抗原免疫活性。以猪圆环病毒2型(PCV-2)为模式抗原，通过体内免疫试验测评，该佐剂的免疫增强活性显著优于进口产品ISA15A VG。本发明提供的水包油型佐剂成功地解决了常规O/W剂型佐剂免疫活性较弱、不能满足兽用疫苗质量要求的难题，可以用于PCV-2等兽用疫苗的生产。

附图说明

图1是环糊精的标准曲线图；

图2是硫酸钠的标准曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明，但本发明不受这些实施例子的限制。

实施例1制备环糊精酯化衍生物

(1)材料与仪器