[发明专利]干细胞的产生和保持

权利要求书

1.通过至少一次细胞分裂培养多能细胞的方法，所述方法包括：

在充足量的：

a.MEK抑制剂；

b.GSK3β抑制剂；和

c.充分的营养足够的时间，

存在时培养多能动物细胞，以允许至少一次细胞分裂同时保持细胞的多能性，其中所述多能动物细胞不是人胚胎干细胞。

2.权利要求1的方法，其中所述GSK3β抑制剂是CHIR99021。

3.权利要求1的方法，其中所述MEK抑制剂是PD0325901。

4.权利要求1的方法，其中所述多能动物细胞进一步在充足量的TGF-β抑制剂存在时培养。

5.权利要求4的方法，其中所述TGF-β抑制剂是ALK5抑制剂。

6.权利要求5的方法，其中所述ALK5抑制剂是A-83-01。

7.权利要求5的方法，其中所述ALK5抑制剂是SB431542。

8.权利要求1的方法，其中所述多能动物细胞进一步在存在足量成纤维细胞生长因子(FGF)受体抑制剂时培养。

9.权利要求8的方法，其中所述FGF受体抑制剂是PD173074。

10.权利要求1的方法，其还包括在充足量的bFGF存在时培养所述多能动物细胞。

11.权利要求1的方法，其中所述多能动物细胞通过至少5次细胞分裂进行培养，同时保持细胞多能性。

12.权利要求1的方法，其还包括向所述多能动物细胞中引入异源核酸，并且培养所得到的细胞，以允许至少一次另外的细胞分裂，同时保持多能性。

13.权利要求12的方法，其中将异源核酸引入到所述多能动物细胞中，然后诱导多能性，再然后进行培养步骤。

14.权利要求1的方法，其中所述多能动物细胞是大鼠细胞或人细胞。

15.权利要求1的方法，其中所述多能动物细胞是灵长类、羊、牛、猫、狗、或猪的细胞。

16.权利要求1的方法，其中所述多能动物细胞是胚胎干细胞。

17.权利要求1的方法，其中所述多能动物细胞是诱导的多能干细胞。

18.多能哺乳动物细胞的培养物，其包括充足量的：

a.MEK抑制剂；和

b.GSK3β抑制剂；

以允许至少一次细胞分裂，同时保持细胞多能性，其中所述多能动物细胞不是人胚胎干细胞。

19.权利要求18的培养物，其中所述GSK3β抑制剂是CHIR99021。

20.权利要求18的培养物，其中所述MEK抑制剂是PD0325901。

21.权利要求18的培养物，其还包括充足量的TGF-β抑制剂。

22.权利要求21的培养物，其中所述TGF-β抑制剂是ALK5抑制剂。

23.权利要求22的培养物，其中所述ALK5抑制剂是A-83-01。

24.权利要求22的培养物，其中所述ALK5抑制剂是SB431542。

25.权利要求18的培养物，其还包括足量成纤维细胞生长因子(FGF)受体抑制剂。

26.权利要求25的培养物，其中所述FGF受体抑制剂是PD173074。

27.权利要求18的培养物，其还包括充足量的bFGF。

28.权利要求18的培养物，其中所述细胞是人细胞或大鼠细胞。

29.权利要求18的培养物，其中所述细胞是胚胎干细胞。

30.一种细胞培养基，其包括充足量的下述：

a.MEK抑制剂；和

b.GSK3β抑制剂；

从而在所述培养基中培养多能细胞时，允许至少一次细胞分裂，同时保持细胞多能性。

31.权利要求30的培养基，其中所述GSK3β抑制剂是CHIR99021。