[发明专利]紫脚板薯组织RNA的提取方法

权利要求书

1.紫脚板薯组织RNA的提取方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将RNA提取液65度水浴15 min；所述RNA提取液为2% SDS，100 mM Tris，25mM EDTA，2M NaCl溶液； 

（2）每取0.5 g紫脚板薯组织材料放入预先加好0.03 g聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）的研钵中，加液氮迅速研磨至粉末；

（3）粉末转移至离心管中，加0.6 ml RNA提取液和24 μl β-巯基乙醇，涡旋数秒后水浴10 min；

（4）加0.6 ml 体积比24: 1氯仿异戊醇后剧烈震荡1 min后，13000 rpm离心8 min； 

（5）取上清，加2.5倍体积的乙醇和0.1倍体积的3 mol/L pH5.2 KAC，混匀，冰浴10 min，13000 rpm离心10 min； 

（6）弃上清，加1 ml 70%乙醇洗涤，13000 rpm离心5 min，弃上清，再稍离心，使残液集于管底，用移液器吸去，置于超净工作台上用无菌风吹2-5 min, 加43 μl 水溶解；

（7）加5 μl DNase Buffer，2 μl DNase，温和混匀，37℃ 30 min；

（8）加350 μl 水、200 μl 酸酚、200 μl 氯仿异戊醇，震荡1 min，13000 rpm离心10 min； 

（9）取上清，加等体积的氯仿异戊醇，氯仿异戊醇体积比24：1，震荡1 min，13000 rpm离心10 min；

（10）取上清，加2.5倍体积的乙醇和0.1倍体积的3 mol/L pH5.2 KAC，混匀，冰浴10 min，13000 rpm离心10 min；

（11）弃上清，加1 ml 70%乙醇洗涤，13000 rpm离心5 min，弃上清，使残液集于管底，用移液器吸去，置于超净工作台上用无菌风吹2-5 min, 加适量水溶解。

2.如权利要求1所述紫脚板薯组织RNA的提取方法，其特征在于配置的试剂均用RNase-free ddH₂O配置。

3.如权利要求1所述紫脚板薯组织RNA的提取方法，其特征在于实验所用枪头、离心管均用0.1% DEPC水浸泡过夜后高压灭菌；所用研钵和玻璃器皿经锡纸包裹后200℃烘烤4-6h。