[发明专利]一种溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核载体构建方法

权利要求书

1.溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核载体构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、根据NCBI公布的基因序列，设计ompK基因引物：Primer1：5’-ACAGGATCCATGCGTAAATCACTTTT-3’；Primer2：5’-ACTCTCGAGTTAGAATTTGTAAGTTAC-3’；

S2、提取溶藻弧菌基因组DNA；

S3、以S2中提取的溶藻弧菌基因组DNA为模板，进行ompK基因的PCR扩增；

S4、取S3中的PCR扩增产物采用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测PCR片断大小；

S5、将S3中的PCR扩增产物与pET-23a质粒载体进行BamH I和Xho I双酶切后，通过T4-连接酶将目的基因插入pET-32a质粒中，转化E.coli DH5a菌株，提取重组质粒后，进行BamH I和Xho I双酶切鉴定，并对重组质粒进行测序测定，与步骤S1所设计的基因引物进行对比，转化重组质粒入E.coli BL21表达菌株。

2.如权利要求1所述的溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核载体构建方法，其特征在于，所述步骤S3中PCR扩增条件为：PCR扩增采用50μL反应体系，反应缓冲液5μL，基因组模板3μL，10mmol/L dNTP2μL，25umol/L引物各1.5μL，Taq酶0.5μL，补水至50μL。

PCR扩增反应条件为：94℃变性3min；30个循环：94℃变性40s，55℃退火45s，72℃延伸60s；72℃延伸10min，最后4℃保温。