[发明专利]一种检测血清中甘油三酯的方法

说明书

本发明属于生物分析化学领域，涉及一种检测血清中甘油三酯的电化学方法。本发明利用了多巴胺在弱碱性条件下自动聚合形成聚多巴胺这种特性，一方面形成的聚多巴胺用于固定酶分子，另一方面原位还原氯金酸产生纳米金作为信号放大元件，以循环伏安(CV)作为电化学检测方法。发展的这种电化学传感策略检测血清中的甘油三酯具有高灵敏度和操作简单等优点，适宜于推广运用。

技术领域

本发明属于生物分析化学领域，涉及一种检测血清中甘油三酯的方法，具体涉及了利用聚多巴胺一方面高效固定生物酶分子，另一方面在多巴胺的聚合过程中原位还原氯金酸起到信号放大作用的电化学传感策略高灵敏度检测血清中的甘油三酯的方法。

背景技术

甘油三酯(Triglyceride，TG)又称中性脂肪，由三分子脂肪酸和一分子甘油酯化而成，是体内能量的主要来源。甘油三酯的水平不仅与总胆固醇(TC)、体质指数(BMI)和血糖(GLU)呈正相关，而且与肥胖密切相关。人体血液中甘油三酯检测十分重要，因为它的高浓度(正常范围男性40～160mg·dL^-1和女性35～135mg·dL^-1)会导致高脂血症，并且甘油三酯浓度增高与动脉粥样硬化风险的增加有关，及时检测有助于诊断和治疗糖尿病、肾病、肝阻塞和其他疾病有关脂质代谢各种内分泌紊乱。但是目前血清中甘油三酯的测定及其临床应用尚存在很多问题，如生物学变异、游离甘油对测定的影响、测定的标准化系统不完善等等。现有技术对血清中甘油三酯的测定主要依赖于大型的生化分析仪，不仅价格昂贵，而且测定的过程中耗时，效率大大降低，电化学分析方法易于操作、价格低廉，倍受分析工作者青睐。

多巴胺是一种神经递质，2007年，美国科学家首次以多巴胺为单体，在弱碱性条件下通过简单的自聚合反应形成了聚多巴胺，它可以在各种材质表面形成仿生的聚多巴胺膜，具有超强的粘附特性，可以固定各种有机和无机材料，在生物传感器领域有着广泛的应用前景。

现有技术未公开以多巴胺为固定脂肪酶的载体且原位还原氯金酸形成纳米金作为信号增强元件，对脂肪酶的活性进行检测的技术方案。

发明内容

本发明的技术目的是提供一种用于检测血清中甘油三酯的简单廉价有效的电化学分析法。此方法首次将聚多巴胺用于固定脂肪酶分子并且在聚合的过程中原位还原氯金酸产生纳米金用于信号放大。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种检测血清中甘油三酯的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)ITO电极的预处理；

(2)把步骤(1)中得到的处理过的ITO电极放入到多巴胺溶液中用缓冲溶液调节pH至碱性条件；

(3)向步骤(2)的体系中加入氯金酸，混匀、反应一段时间得到聚多巴胺-纳米金修饰的ITO电极；

(4)向步骤(3)中得到的聚多巴胺-纳米金修饰的ITO电极表面滴加脂肪酶溶液，低温阴干，得到聚多巴胺-纳米金-脂肪酶生物酶电极；

(5)得到甘油三酯检测标准曲线：将聚多巴胺-纳米金-脂肪酶修饰电极放置于含有梯度浓度甘油三酯的缓冲溶液中反应一定的时间后，用超纯水清洗上述电极后将其放置于含有铁氰化钾溶液中进行电化学扫描，得到不同浓度甘油三酯对应的循环伏安峰电流；使用还原峰电流作为纵坐标，甘油三酯浓度作为横坐标，绘制甘油三酯的标准曲线。

(6)血清中甘油三酯回收率的测定：首先除去健康人血清中固有的甘油三酯，然后加入不同浓度的甘油三酯，和步骤(5)绘制标准曲线的操作条件相同进行电化学检测，得到的数据在步骤(5)的标准曲线上进行比对，计算甘油三酯的回收率。

本发明所述的方法，所述步骤(1)所述的ITO电极的预处理应理解是现有技术中任意的ITO电极的预处理方法，本发明对此不作任何的限定。