[发明专利]一种绿藻糖基微胶囊生物菌剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种绿藻糖基微胶囊生物菌剂，包括囊内物质和囊壁物质，其特征在于：所述囊内物质包括嗜热脂肪地芽孢杆菌、花域芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌和西姆芽孢杆菌，所述四株菌均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：嗜热脂肪地芽孢杆菌为CGMCC No.7572、花域芽孢杆菌为CGMCC No.7571、甲基营养型芽孢杆菌菌株为CGMCC NO.7570、西姆芽孢杆菌为CGMCC No.7285；所述囊壁物质主要组分是浒苔多糖。

2. 根据权利要求1所述的一种绿藻糖基微胶囊生物菌剂，其特征在于：所述绿藻糖基微胶囊生物菌剂中，四株菌的菌含量为：嗜热脂肪地芽孢杆菌20%、花域芽孢杆菌10%、甲基营养型芽孢杆菌10%、西姆芽孢杆菌60%，按活菌数百分比计算。

3. 根据权利要求1-2 所述的绿藻糖基微胶囊生物菌剂的制备方法，其特征在于它包括以下步骤：

(1) 制备一级种子液：将所述四菌株在温度为35℃下恒温摇床培养得到一级种子液；

(2) 制备二级种子液：将所述一级种子液按5%的接种量接种到二级发酵罐中培养得到二级种子液，培养温度与步骤(1) 相同；

(3) 发酵生产：将所述二级种子液分别转接入生产发酵罐中，通气量为100-150 升/ 分钟；以发酵液中芽孢含量超过80% 为指标，终止发酵；

(4) 菌液复配：将四菌株的发酵液混合复配得到混合菌液；

(5) 制备菌剂产品：将所述混合菌液过筛，加入浒苔多糖，复配得到绿藻糖基微胶囊生物菌剂。

4. 根据权利要求3所述的绿藻糖基微胶囊生物菌剂的制备方法，其特征在于所述浒苔多糖的制备方法包括以下步骤：

a.预处理：将浒苔粉经过热水浸提得到可溶组分，将所述可溶组分进行过氧化氢预处理；

b.提取：利用生物酶法对所述步骤(a)所得产物进行提取；

c.分级洗脱：将所述步骤(b)所得产物和不同浓度NaCl经DEAE Sepharose Fast Flow分级洗脱，得到所述浒苔多糖。

5. 根据权利要求3或4 所述的绿藻糖基微胶囊生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(1) 摇床转速150-220 转/ 分钟，步骤(2) 二级发酵罐转速为100-150 转/ 分钟，步骤(3) 生产发酵罐转速为100-150 转/ 分钟。

6. 根据权利要求3或4所述的绿藻糖基微胶囊生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(2) 中二级种子的发酵培养基分别为：

西姆芽孢杆菌：玉米粉 2.0 g/L，葡萄糖 10.0 g/L，豆饼粉 10.0 g/L，蛋白胨4.0 g/L，碳酸钙 5.0 g/L，磷酸氢二钾 0.3 g/L，硫酸镁 0.4 g/L，硫酸锰0.1 g/L，pH 值7.5-8.0；

嗜热脂肪地芽孢杆菌：淀粉3.0 g/L，葡萄糖5.0 g/L，豆粕25.0 g/L，蛋白胨2.0g/L，碳酸钙5.0 g/L，磷酸氢二钾0.3 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.1 g/L，pH 值7.5-8.0；

甲基营养型芽孢杆菌：淀粉3.0 g/L，蔗糖5.0 g/L，豆粕10.0 g/L，蛋白胨2.0 g/L，碳酸钙5.0 g/L，磷酸氢二钾0.3 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.1 g/L，pH 值7.0-7.5；

花域芽孢杆菌：玉米粉8.0-10.0 g/L，淀粉2.0-5.0 g/L，葡萄糖 3.0-5.0 g/L，蛋白胨1.0-3.0 g/L，豆饼粉8.0-10.0 g/L，蔗糖2.0-3.0 g/L，磷酸氢二钾0.5-1.0 g/L，碳酸钙3.0-5.0 g/L，七水硫酸镁0.8-1.0 g/L，硫酸锰0.1-0.5 g/L，消泡剂1.5-3.0 g/L，pH 8.0-8.5。

7. 根据权利要求3或4所述的微生物腐熟菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(3) 中发酵培养前10 小时转速为100 转/ 分钟，通气量为100 升/ 分钟；10-16 小时转速为120 转/ 分钟，通气量为150 升/ 分钟；16 小时后至发酵结束，转速为150 转/ 分钟，通气量200 升/ 分钟，四菌株发酵时间为18-24 小时。

8. 根据权利要求1-2所述的绿藻糖基微胶囊生物菌剂在农牧业废弃物和浒苔中的应用。