[发明专利]一种绿藻糖基微胶囊生物菌剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种绿藻糖基微胶囊生物菌剂及其制备方法和应用。

背景技术

我国是一个农业大国，农作物的产量及质量关系着国计民生。目前，促进和保护作物生长主要靠使用农药、化肥，但农药、化肥的过量滥用，造成土壤板结、土壤盐渍化和重金属污染，严重污染农业生态环境，危害人类的健康。

近年来，在国家政策允许下，一部分农药、化肥逐步被微生态合剂代替，微生态制剂既有肥料的效果，又有农药的功效，把植物保护与植物营养合二为一，同时，微生物肥料也存在着多种菌株共生性较差、无法适应胁迫环境、与无机肥料复配存活率较低等弊端。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对我国化学肥料过量滥用、生物肥料使用的多种弊端，本发明提供了一种绿藻糖基微胶囊生物菌剂及其制备方法和应用。本发明所述绿藻糖基微胶囊生物菌剂无污染，能够达到肥料和农药的配合使用功效，工艺简单、成本低，具有有利于保护环境、抗病性和抗逆性强、提高存活率、易于产业化生产等优点。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

一种绿藻糖基微胶囊生物菌剂，它包括囊内物质和囊壁物质：所述囊内物质包括嗜热脂肪地芽孢杆菌、花域芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌和西姆芽孢杆菌，所述四株菌均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：嗜热脂肪地芽孢杆菌为CGMCC No.7572、花域芽孢杆菌为CGMCC No.7571、甲基营养型芽孢杆菌菌株为CGMCC NO.7570、西姆芽孢杆菌为CGMCC No.7285；所述囊壁物质主要组分是浒苔多糖。

进一步的，所述绿藻糖基微胶囊生物菌剂中，四株菌的菌含量为：嗜热脂肪地芽孢杆菌20%、花域芽孢杆菌10%、甲基营养型芽孢杆菌10%、西姆芽孢杆菌60%，按活菌数百分比计算。

本发明还提供了所述绿藻糖基微胶囊生物菌剂的制备方法，它包括以下步骤：

(1) 制备一级种子液：将所述四菌株在温度为35℃下恒温摇床培养得到一级种子液；

(2) 制备二级种子液：将所述一级种子液按5%的接种量接种到二级发酵罐中培养得到二级种子液，培养温度与步骤(1) 相同；

(3) 发酵生产：将所述二级种子液分别转接入生产发酵罐中，通气量为100-150 升/ 分钟；以发酵液中芽孢含量超过80% 为指标，终止发酵；

(4) 菌液复配：将四菌株的发酵液混合复配得到混合菌液；

(5) 制备菌剂产品：将所述混合菌液过筛，加入浒苔多糖，复配得到绿藻糖基微胶囊生物菌剂。

进一步的，所述浒苔多糖的制备方法包括以下步骤：

a.预处理：将浒苔粉经过热水浸提得到可溶组分，将所述可溶组分进行过氧化氢预处理；

b.提取：利用生物酶法对所述步骤(a)所得产物进行提取；

c.分级洗脱：将所述步骤(b)所得产物和不同浓度NaCl经DEAE Sepharose Fast Flow分级洗脱，得到所述浒苔多糖。

进一步的，上述绿藻糖基微胶囊生物菌剂的制备方法中，所述步骤(1) 摇床转速150-220 转/ 分钟，步骤(2) 二级发酵罐转速为100-150 转/ 分钟，步骤(3) 生产发酵罐转速为100-150 转/ 分钟。

所述步骤(2) 中二级种子的发酵培养基分别为：

西姆芽孢杆菌：玉米粉 2.0 g/L，葡萄糖 10.0 g/L，豆饼粉 10.0 g/L，蛋白胨4.0 g/L，碳酸钙 5.0 g/L，磷酸氢二钾 0.3 g/L，硫酸镁 0.4 g/L，硫酸锰0.1 g/L，pH 值7.5-8.0；

嗜热脂肪地芽孢杆菌：淀粉3.0 g/L，葡萄糖5.0 g/L，豆粕25.0 g/L，蛋白胨2.0g/L，碳酸钙5.0 g/L，磷酸氢二钾0.3 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.1 g/L，pH 值7.5-8.0；

甲基营养型芽孢杆菌：淀粉3.0 g/L，蔗糖5.0 g/L，豆粕10.0 g/L，蛋白胨2.0 g/L，碳酸钙5.0 g/L，磷酸氢二钾0.3 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.1 g/L，pH 值7.0-7.5；