[发明专利]一种检测脂肪酶酶活的荧光法

权利要求书

1.一种检测脂肪酶酶活的荧光法，其特征在于，利用了天然物质姜黄素具有荧光的特点，将姜黄素作为荧光信号元件，同时吐温既作为脂肪酶的底物又作为包裹信号分子姜黄素的载体；具体包括如下步骤：

(1)分别向2mL A、B离心管中加入吐温溶液；

(2)向步骤(1)中得到的A、B离心管溶液中加入由甲醇溶液配制的姜黄素溶液进行包裹；

(3)向步骤(2)中得到的A、B离心管溶液分别加入缓冲溶液进行pH的调节；后向B离心管加入待测脂肪酶溶液，A离心管不需要加入待测脂肪酶溶液；混匀，调节反应温度，B离心管中的吐温溶液的胶束结构被脂肪酶水解，姜黄素暴露在缓冲溶液当中发生降解，检测A、B离心管溶液的荧光光谱，得到不同时间对应的荧光光谱，然后以荧光强度的差值ΔF₅₀₅作为纵坐标，时间为横坐标，绘制脂肪酶酶活的动力学曲线。

2.根据权利要求1所述的检测脂肪酶酶活的荧光法，其特征在于，所述步骤(1)中加入吐温溶液的最终浓度为0.3mmol/L。

3.根据权利要求1所述的检测脂肪酶酶活的荧光法，其特征在于，所述步骤(2)中由甲醇溶液配制的姜黄素溶液的最终浓度为25μmol/L。

4.根据权利要求1所述的检测脂肪酶酶活的荧光法，其特征在于，所述步骤(3)中的缓冲溶液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠-氯化钠缓冲溶液。

5.根据权利要求1所述的检测脂肪酶酶活的荧光法，其特征在于，所述步骤(3)中加入缓冲溶液将最终形成吐温包裹姜黄素溶液pH值调至7.4。

6.根据权利要求1所述的检测脂肪酶酶活的荧光法，其特征在于，所述步骤(3)中待测脂肪酶溶液反应温度为37℃。

7.根据权利要求1所述的检测脂肪酶酶活的荧光法，其特征在于，所述步骤(3)中待测脂肪酶酶溶液的加入量为2mg/mL。