[发明专利]抗联苯菊酯单克隆抗体及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗联苯菊酯单克隆抗体，尤其是一种可特异性识别联苯菊酯的单克隆抗体，产生所述单克隆抗体的杂交瘤，以及该单克隆抗体的用途，属于生物学技术领域。 

背景技术

拟除虫菊酯类(Pyrethroids)杀虫剂是根据天然除虫菊素的化学结构而仿制成的一类超高效杀虫剂，由于其杀虫谱广，效果好、低残留，无蓄积作用等优点，近30年来应用日益普遍。拟除虫菊酯类杀虫药主要用于杀灭棉花、蔬菜、果树、茶叶等农作物上的害虫，是一种广谱高效的杀虫剂。联苯菊酯酯化学名称为(1R，S)-顺式-(Z)-3-(2-氯-3，3，3-三氟-1-丙烯基)-2，2-二甲基-环丙烷羧酸-2-甲基-3-苯基苄酯，联苯菊酯(Bifenthrin)作为一种强烈的驱白蚁药剂，具有预防、灭治双重效果，于2001年被中国物协白蚁防治专业委员会列为城市房屋预防白蚁的5种药剂之一。在保证作为土壤化学屏障的联苯菊酯施药量的同时，也要预防其应用存在的潜在风险，因此需要建立一种针对联苯菊酯的灵敏、快速、选择性的残留检测方法。 

目前联苯菊酯的残留检测方法大多采用仪器分析方法，如气相色谱分析法。这些仪器分析方法灵敏准确，但检测仪器昂贵、样品前处理较繁琐、检测费时费力、难以满足大量样品快速简便检测的需要。 

免疫检测方法具有快速、廉价、简便、灵敏、特异的优点，在大量样品快速筛选和现场监测中显示出独特优势。酶联免疫分析(ELISA)是一种将酶催化反应和免疫反应相结合的免疫标记测定技术，有酶催化反应的高灵敏度和抗原抗体反应的高特异性，在灵敏度方面有很大的优势。ELISA作为一种快速灵敏的检测方法，在许多小分子免疫分析中已得到较成熟的应用。通过制备针对联苯菊酯的特异性抗体，建立联苯菊酯免疫学检测方法。该发明方法的完成，将解决联苯菊酯抗体制备关键技术，建立联苯菊酯的ELISA快速检测技术。该发明为建立防治白蚁的土壤化学屏障提供有效的技术手段和检测方法，具有重要的现实意义和重要的社会、经济价值。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种抗联苯菊酯单克隆抗体及其对环境或农产品中的联苯菊酯进行免疫检测的用途。 

按照本发明提供的技术方案，所述抗联苯菊酯单克隆抗体，由保藏编号为CCTCC No.C2014135的杂交瘤细胞株3D4产生，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为中国武汉武汉大学，保藏日期为2014年7月11日。 

所述杂交瘤细胞株3D4，其保藏编号为CCTCC No.C2014135。 

所述抗联苯菊酯单克隆抗体的制备方法，其特征是，包括以下步骤： 

(1)将式(Ⅰ)所示的免疫半抗原偶联BSA制备得到免疫原； 

(2)用免疫原免疫BALB/c小鼠，免疫剂量为100μL免疫原/只，共免疫五次；首次免疫由等体积的免疫原和弗氏完全佐剂乳化，腹腔注射，之后用等体积免疫抗原和弗氏不完全佐剂乳化；从第三次免疫开始，每次免疫后尾静脉采血，测定效价； 

(3)待效价稳定后，将骨髓瘤细胞SP2/0与上述效价最好的小鼠脾脏细胞进行细胞融合，脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0的比例为10：l，制备得到杂交瘤细胞； 

(4)通过系列筛选和亚克隆得到能稳定分泌抗联苯菊酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株；再将该杂交瘤细胞株注射小鼠腹内制得腹水； 

(5)采用辛酸-硫酸铵法纯化小鼠腹水，得到所述的单克隆抗体。 

所述的单克隆抗体在制备用于检测联苯菊酯的检测工具中的应用。所述检测工具为试剂盒、芯片或试纸。 

本发明具有以下有益效果：(1)新颖：抗联苯菊酯单克隆抗体为国内外首次报道；(2)实用：利用本发明提供的抗联苯菊酯单克隆抗体实现的ic-ELISA具有操作简单快速(只需要2-3小时)、分析成本低、分析容量大、安全可靠、容易普及推广，特别适用于大批量样品检测和现场监测，可以与传统仪器分析方法互为补充；(3)特异性强：产生的抗体特异性识别联苯菊酯，与其他拟除虫菊酯类杀虫剂没有明显的交叉反应；(4)准确度高：利用本发明提供的抗联苯菊酯单克隆抗体实现的ic-ELISA在土壤样品中的添加回收率为83.5-104.7％，变异系数低于15.0％，符合残留分析标准；(5)灵敏度高：利用本发明提供的抗联苯菊酯单克隆抗体实现的ic-ELISA的抑制中浓度(IC50)为0.05mg/L，检测限(IC10，LOD)为0.004mg/L，线性范围为0.004-0.7mg/L。 

附图说明