[发明专利]一种制备依诺肝素钠的工艺

权利要求书

1.一种制备依诺肝素钠的工艺，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：

S1：肝素-苄索氯铵盐的制备：将肝素钠和苄索氯铵分别溶解于纯化水中，得肝素钠溶解液和苄索氯铵溶解液，室温搅拌下将肝素钠溶解液缓慢加入到苄索氯铵溶解液中，加入完毕后继续室温下搅拌，收集沉淀物，即为肝素-苄索氯铵盐，并将其在50℃～60℃真空干燥，得到含水量低于5％的肝素-苄索氯铵盐；

S2：肝素苄基酯的制备：将步骤S1中得到的肝素-苄索氯铵盐溶解于二氯甲烷中，在25～45℃下搅拌至充分溶解，加入氯化苄，继续搅拌反应24～48小时，再将反应液压入过滤器内，加入醋酸钠甲醇溶液，析出沉淀，静置，利用压缩空气压滤，甲醇洗涤，沉淀冷冻干燥，得到含水量低于5％、酯化率大于9的肝素苄基酯；

S3：肝素苄基酯的裂解：将步骤S2中得到的肝素苄基酯充分溶解于纯化水中，搅拌，并在35～65℃下加入氢氧化钠，反应1～3小时，冷却到室温，调pH到中性，加入氯化钠，析出油状物，板框过滤，过膜，加入甲醇析出沉淀，滤板过滤，乙醇洗涤，空气压干，得沉淀物；

S4：依诺肝素钠的脱色：将步骤S3中所述的沉淀物用水充分溶解，调pH到碱性，室温脱色10～20分钟，pH调回到中性，准备进行阴离子交换层析；

S5：阴离子交换层析：采用阴离子交换树脂，按25-35mg低分子肝素钠/ml-resin上样，温度为室温，检测波长为UV232nm，上样结束后先用350～550mmol/L的氯化钠溶液洗涤，再用1～2mol/L的氯化钠溶液洗脱，洗脱终点为232nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液，检测分子量分布为重均分子量4000～4600，2000～8000分子量的比例为72-78％；

S6：冻干：酒精沉淀，除菌，冻干，得到所述的依诺肝素钠。

2.根据权利要求1所述的制备依诺肝素钠的工艺，其特征在于：步骤S1中，所述肝素-苄索氯铵盐的获得方法为：将肝素钠溶解液缓慢加入到苄索氯铵溶解液中后继续室温下搅拌1～5小时，将初步得到的沉淀物离心，反复用纯化水洗涤，再离心，直到滤液遇10％的硝酸银溶液不显浑浊的沉淀物为所述的肝素-苄索氯铵盐，然后将其真空干燥，得到最终含水量低于5％的肝素苄索氯铵盐。

3.根据权利要求1所述的制备依诺肝素钠的工艺，其特征在于：步骤S2中，肝素苄基酯的具体制备方法为：将步骤S1中得到的肝素-苄索氯铵盐按1∶1～5溶解于二氯甲烷中，开启机械搅拌，在25～45℃下搅拌至充分溶解，加入1～5倍量的氯化苄，继续保持25～45℃，搅拌反应24～48小时，将反应液压入三合一滤器，边搅拌边加入醋酸钠甲醇溶液，析出沉淀，静置，利用压缩空气压滤，甲醇洗涤，反复几次直至滤液遇水无乳化现象，沉淀冷冻干燥24小时，得到肝素苄基酯，含水量低于5％，酯化率大于9。

4.根据权利要求3所述的制备依诺肝素钠的工艺，其特征在于：加入等体积的10％醋酸钠甲醇溶液。

5.根据权利要求1所述的制备依诺肝素钠的工艺，其特征在于：在步骤S3中，将肝素苄基酯按1∶1～30的重量比加入至纯化水中并充分溶解。

6.根据权利要求1所述的制备依诺肝素钠的工艺，其特征在于：将步骤S3中充分溶解于纯化水中的肝素苄基酯在35～65℃的搅拌条件下加入5％～12％氢氧化钠固体的溶解液，反应完毕后接上冷媒管迅速冷却到室温。

7.根据权利要求1所述的制备依诺肝素钠的工艺，其特征在于：所述过膜为过0.45μm的膜。

8.根据权利要求1所述的制备依诺肝素钠的工艺，其特征在于：步骤S4中，通过加入0.5～1.5％的双氧水在室温下进行脱色。

9.根据权利要求1所述的制备依诺肝素钠的工艺，其特征在于：步骤S6中所述酒精沉淀是向洗脱液中加入两倍酒精进行沉淀，开启冷媒，静置过夜，第二天弃去上清液，沉淀再加一倍酒精进行脱水，弃去上清，加入一定量的纯化水进行溶解。

10.根据权利要求1所述的制备依诺肝素钠的工艺，其特征在于：步骤S6中所述的除菌为通过除菌膜进行除菌。