[发明专利]一种制备依诺肝素钠的工艺

说明书

技术领域

本发明涉及医药和化学领域中的一种药用化学药品的制备，具体涉及一种制备依诺肝素钠的工艺。

背景技术

肝素自上世纪80年代以来一直是预防和治疗血栓类药物的首选药物，低分子肝素(包括达肝素钠、依诺肝素、那屈肝素)是由普通肝素通过特异性的化学切割和纯化分离制成，自上个世纪末，赛诺菲公司的依诺肝素被美国FDA批准在美国上市以来，低分子肝素由于其疗效确切，副作用小而且可预测等优点，逐步取代了传统肝素的市场地位。依诺肝素可有效预防静脉血栓栓塞症和肺栓塞症，可用于矫形外科、神经外科术前和术后血栓形成，可大大降低患中风风险，能更有效减少不稳定性冠状动脉综合症患者的死亡、心力衰竭、复发性心绞痛等，并可降低高甘油三脂血症，能有效解决普通未分级肝素及其衍生物长期使用后的出血、骨质疏松、诱导血小板减少等副作用。

由于低分子肝素类多糖药物由一系列未能完全鉴别的寡糖混合物组成，结构及其复杂，无法依靠单一方法对其进行结构确定，技术难度很高，所以对国内企业来说，形成了进入欧美高附加值终端市场特别是美国市场的一个技术壁垒。

目前，国内有采用酒精分级沉淀、超滤膜分离、分子筛和凝胶过滤层析的方法来控制依诺肝素的分子量，这些方法有个共同的特点就是收率很低，一般只有20％以下，分子量控制精度低，且不同程度的具有费时、费力，自动化程度低的缺点，不适合大规模生产，限制了产能的提升。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备依诺肝素钠的工艺，该方法通过采用阴离子交换树脂层析等得到收率高、高纯度的依诺肝素钠产品，且该工艺自动化程度高，操作便捷，为提升产能提供了有力保障，适合大规模生产；克服了现有技术中的费时、费力，自动化程度低，不适合大规模生产，并限制了产能的提升的不足。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现：

一种制备依诺肝素钠的工艺，该制备方法包括以下步骤：

S1：肝素-苄索氯铵盐的制备：将肝素钠和苄索氯铵分别溶解于纯化水中，得肝素钠溶解液和苄索氯铵溶解液，室温搅拌下将肝素钠溶解液缓慢加入到苄索氯铵溶解液中，加入完毕后继续室温下搅拌，收集沉淀物，即为肝素-苄索氯铵盐，并将其在50℃～60℃真空干燥，得到含水量低于5％的肝素-苄索氯铵盐；

S2：肝素苄基酯的制备：将步骤S1中得到的肝素-苄索氯铵盐溶解于二氯甲烷中，在25～45℃下搅拌至充分溶解，加入氯化苄，继续搅拌反应24～48小时，再将反应液压入过滤器内，加入醋酸钠甲醇溶液，析出沉淀，静置，利用压缩空气压滤，甲醇洗涤，沉淀冷冻干燥，得到含水量低于5％、酯化率大于9的肝素苄基酯；

S3：肝素苄基酯的裂解：将步骤S2中得到的肝素苄基酯充分溶解于纯化水中，搅拌，并在35～65℃下加入氢氧化钠，反应1～3小时，冷却到室温，调pH到中性，加入氯化钠，析出油状物，板框过滤，过膜，加入甲醇析出沉淀，滤板过滤，乙醇洗涤，空气压干，得沉淀物；

S4：依诺肝素钠的脱色：将步骤S3中所述的沉淀物用水充分溶解，调pH到碱性，室温脱色10～20分钟，pH调回到中性，准备进行阴离子交换层析；

S5：阴离子交换层析：采用阴离子交换树脂，按25-35mg低分子肝素钠/ml-resin上样，温度为室温，检测波长为UV232nm，上样结束后先用350～550mmol/L的氯化钠溶液洗涤，再用1～2mol/L的氯化钠溶液洗脱，洗脱终点为232nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液，检测分子量分布为重均分子量4000～4600，2000～8000分子量的比例为72-78％；

S6：冻干：酒精沉淀，除菌，冻干，得到所述的依诺肝素钠。

进一步优选地，步骤S1中，所述肝素-苄索氯铵盐的获得方法为：将肝素钠溶解液缓慢加入到苄索氯铵溶解液中后继续室温下搅拌1～5小时，将初步得到的沉淀物离心，反复用纯化水洗涤，再离心，直到滤液遇10％的硝酸银溶液不显浑浊的沉淀物为所述的肝素-苄索氯铵盐，然后将其真空干燥，得到最终含水量低于5％的肝素苄索氯铵盐。

进一步优选地，步骤S2中，肝素苄基酯的具体制备方法为：将步骤S1中得到的肝素-苄索氯铵盐按1∶1～5溶解于二氯甲烷中，开启机械搅拌，在25～45℃下搅拌至充分溶解，加入1～5倍量的氯化苄，继续保持25～45℃，搅拌反应24～48小时，将反应液压入三合一滤器，边搅拌边加入醋酸钠甲醇溶液，析出沉淀，静置，利用压缩空气压滤，甲醇洗涤，反复几次直至滤液遇水无乳化现象，沉淀冷冻干燥24小时，得到肝素苄基酯，含水量低于5％，酯化率大于9。