[发明专利]神经元与神经胶质细胞有序共培养装置、制备方法及神经元与神经胶质细胞有序共培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及细胞生物学领域，具体涉及一种用于神经元与神经胶质细胞有序共培养的装置、其制备方法及神经元与神经胶质细胞有序共培养的方法。

背景技术

近年来的研究结果表明，神经元与神经胶质细胞不仅存在物质交换，也存在信息交换。神经元与胶质细胞之间相互作用方式如何影响其物质、信息交流，以及它们相互作用方式的改变与多种脑部疾病如阿尔兹海默症、帕金森综合症等相关性研究成为神经科学的又一研究热点。

目前可用于研究神经元与胶质细胞相互作用体外共培养体系是Banker等于20世纪90年代建立起来的以培养神经元细胞为目的的培养方法，有学者在此基础上进行改良，成功建立了神经元与胶质细胞的共培养方法。但是上述方法是以胶质细胞为滋养层，在其表面接种上神经元细胞，两种细胞无序错落生长，难以用于研究神经元与胶质细胞相互作用研究。

专利号为200710117815.8和200710119997.2的发明专利基于微流控技术建立了在金表面多种细胞共培养装置及方法，此两种粘附和操纵多种细胞的方法所用基底均采用在玻璃表面蒸镀一层金的方法制备，这种基底需要在超净间利用高真空设备制备，价格较贵，并且金层性质不稳定，不可以长期保存，不利于在生物实验室推广。

专利号为201010105018.X的发明专利公开了一种基于微流控技术建立了在玻璃表面研究多种细胞相互作用的装置及其制备方法和用途，这种方法将多种细胞分别接种于不同的微流孔道中待其在基底粘附后，除去微流孔道，实现多种细胞相互作用。但是这种装置用于神经元和神经胶质细胞有序共培养时存在很多不足，第一，在微流孔道中接种细胞，细胞在狭长的孔道中分布不均匀；第二，细胞在微流孔道中由于培养基量少，细胞生存时间很短，而较短的时间并不能保证神经元与胶质细胞同时处于培养好的时间段；如果要不停的更换培养基，易使细胞漂浮，最终不稳定死亡；第三，微流孔道中细胞容量少，用于研究两种胞相互作用的群体效应不明显，不利于观察研究。另外，由于神经元细胞不能传代培养，而上述装置要求各种细胞接种时间不宜间隔过长，因此，上述装置难以用于神经元与神经胶质细胞相互作用研究。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于神经元与神经胶质细胞有序共培养的装置及其制备方法及神经元与神经胶质细胞有序共培养的方法，使得本发明所述装置在接种神经元细胞与胶质细胞时易于控制细胞均匀性，并可以延长两种细胞接种间隔时间，实现神经元与神经胶质细胞的有序共培养，增加可使用细胞量。

为实现以上发明目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于神经元与神经胶质细胞有序共培养的装置，包括基底和聚二甲基硅氧烷印章，所述聚二甲基硅氧烷印章可移除地复合在所述基底上；

所述聚二甲基硅氧烷印章包含至少一个微孔单元，所述微孔单元包含依次排列的、至少一个垂直于所述基底的第一通孔和至少一个垂直于所述基底的第二通孔，所述第一通孔和第二通孔分别与基底表面形成一端开口的凹槽；

所述第一通孔和第二通孔的距离为500μm～2000μm。

为了便于理解本发明所述装置的发明原理，可参见图1，需要说明的是，本发明附图不对其中的形状、尺寸、材质进行限定，其只是为了便于在本发明权利要求描述的基础上理解本发明装置核心技术，本领域技术人员能够在本发明附图的基础上，合理预料到本发明限定的各种形状、尺寸和材质的其他不脱离本发明发明原理的装置。

针对现有专利201010105018.X基于微流控技术建立的在玻璃表面研究多种细胞相互作用的装置的缺陷，本发明以成本低廉、简单易操作的新型细胞共培养装置，解决了其接种细胞均匀性不易控制、两种细胞接种间隔时间短，可使用细胞量较少的问题，尤其适用于神经元与神经胶质细胞有序共培养。

本发明提供的用于神经元与神经胶质细胞有序培养的装置包括基底，所述基底优选具有平整表面，以便与聚二甲基硅氧烷印章紧密结合，防止漏液。所述基底可以为任意能够用于培养细胞的盖玻片、载玻片、细胞培养皿等，本发明对此并无特殊限制。所述基底表面可以孵育有细胞外基质，也可以在使用时，即用于神经元与神经胶质细胞培养时再孵育细胞外基质。作为优选，所述细胞外基质为多聚赖氨酸，更优选为左旋多聚赖氨酸。