[发明专利]检测稀有循环细胞内多种信号转导分子的基于抗体的阵列

权利要求书

1.一种进行具有高动态范围的多重、高通量免疫测定的方法，该方法包括：

(a)将细胞提取物与该细胞提取物中一种或多种分析物的特异性捕获抗体的众多稀释系列一起培育以形成众多捕获分析物，其中所述捕获抗体局限在固相支持体上；

(b)将所述众多捕获的分析物与相应分析物的特异性检测抗体一起培育以形成众多可检测的捕获分析物，其中所述检测抗体包含：

(1)众多用易化部分标记的活化状态非依赖性抗体，所述活化状态非依赖性抗体对样品中一种或多种感兴趣分析物具有特异性而不考虑它们的活化状态，所述易化部分是任何能够生成导向相近易化部分的另一个分子并与之反应的氧化剂的分子，和

(2)众多用信号放大对的第一成员标记的活化状态依赖性抗体，所述活化状态依赖性抗体对样品中一种或多种感兴趣分析物的特定活化状态具有特异性，

其中所述易化部分产生导向信号放大对的第一成员并与其反应的氧化剂；

(c)将众多可检测的捕获分析物与信号放大对的第二成员一起培育以产生放大信号；和

(d)检测信号放大对的第一和第二成员产生的放大信号，

其中所述方法不用于疾病的诊断或治疗。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞提取物包括实体瘤循环细胞的提取物。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述细胞是通过免疫磁分离从患者样品中分离的。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述患者样品选自下组：全血，血清，血浆，尿液，痰液，支气管灌洗液，泪液，乳头抽吸物，淋巴液，唾液，细针抽吸物，以及它们的组合。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述细胞选自下组：循环肿瘤细胞，循环内皮细胞，循环内皮祖细胞，癌症干细胞，以及它们的组合。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述细胞用生长因子体外刺激。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述细胞用生长因子刺激之前与选自单克隆抗体，酪氨酸激酶抑制剂，免疫抑制剂，以及它们的组合的抗癌药一起培育。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述细胞用生长因子刺激之后被裂解以产生细胞提取物。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述一种或多种分析物包括众多信号转导分子。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相支持体选自下组：玻璃，塑料，纸，以及它们的组合。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相支持体选自下组：针，珠，膜，纤维束，以及它们的组合。

12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相支持体选自下组：芯片，滤器，以及它们的组合。

13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化状态非依赖性抗体还包含可检测部分。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述可检测部分的量与一种或多种分析物的量相关。

15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化状态非依赖性抗体用易化部分直接标记，其中所述易化部分是葡萄糖氧化酶。

16.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化状态非依赖性抗体通过偶联于活化状态非依赖性抗体的寡核苷酸与偶联于易化部分的互补寡核苷酸之间的杂交而用易化部分标记。

17.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化状态依赖性抗体用信号放大对的第一成员直接标记。

18.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化状态依赖性抗体通过偶联于活化状态依赖性抗体的结合对第一成员与偶联于信号放大对的第一成员的结合对第二成员之间的结合而用信号放大对的第一成员标记，所述结合对第一成员是生物素，所述结合对第二成员是链霉抗生物素蛋白。

19.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述信号放大对的第一成员是辣根过氧化物酶(HRP)。

20.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述信号放大对的第二成员是酪酰胺试剂，其是生物素-酪酰胺。