[发明专利]预测巨大肝癌患者术后近期复发转移概率的模型及方法

权利要求书

1.一种用于预测巨大肝癌患者术后复发转移概率的数学模型P＝1/(1+Y)， P为巨大肝癌患者术后近期复发转移概率，且P为6个月内的复发转移 概率时：Y＝exp(4.092+2.073*X12-2.719*X14-2.58*X17+3.039*X 19)；P为6-12个月的复发转移概率时，Y＝e xp(2.528+1.633*X8+0.971 *X12-1.517*X17)；其中X8为术中癌栓，若有则X8＝1、若无则X8＝0； X12为肿瘤分级，I级时X12＝1、II-III级时X12＝2、IV级时X12＝3； X14为IQGAP-2蛋白免疫组化表达情况，高表达时X14＝2、低表达时 X14＝1；X17为S100A12蛋白免疫组化表达情况，高表达时X17＝2、低 表达时X17＝1；X19为APOA2蛋白免疫组化表达情况，高表达时X19＝2、 低表达时X19＝1。

2.一种预测巨大肝癌患者术后近期复发转移概率的方法，所述方法包括：

(1)取巨大肝癌患者活检组织或术中、术后的病理取材作为病理标本， 并对病理标本的术中癌栓、肿瘤分级情况进行记录分析；

(2)采用免疫组化SP染色法，分别获得病理标本IQGAP-2蛋白的免疫 组化评分、S100A12蛋白的免疫组化评分和APOA12蛋白的免疫组 化评分；

(3)将上述取值分别代入6个月内的复发转移概率数学模型P＝1/(1+Y)， Y＝exp(4.092+2.073*X12-2.719*X14-2.58*X17+3.039*X19)； 和6～12个月的复发转移概率数学模型P＝1/(1+Y)，Y＝e xp(2.528 +1.633*X8+0.971*X12-1.517*X17)，分别进行计算获得6个月 内和6～12个月的复发转移概率；其中X8为术中癌栓，若有则X8＝1、 若无则X8＝0；X12为肿瘤分级，I级时X12＝1、II-III级时X12＝2、 IV级时X12＝3；X14为IQGAP-2蛋白免疫组化表达情况，高表达时 X14＝2、低表达时X14＝1；X17为S100A12蛋白免疫组化表达情况， 高表达时X17＝2、低表达时X17＝1；X19为APOA2蛋白免疫组化表 达情况，高表达时X19＝2、低表达时X19＝1。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述免疫组化SP染色法方法如 下：

(a)取病理标本制备肝癌组织石蜡切片，60℃烤箱过夜；

(b)切片脱腊；二甲苯I：10min；二甲苯II：10min；二甲苯III：10min；

(c)切片水化；依次浸泡：无水乙醇：3min；90％乙醇：3min；80％乙 醇：3min；75％乙醇：3min；

(d)PBS清洗3次，每次5min；

(e)EDTA抗原高压修复：切片放入0.01M EDTA修复液浸泡，沸水浴 5min，冷却至室温，PBS清洗3次，每次5min；

(f)加入300μL的3％过氧化氢水溶液，37℃10min，PBS清洗3次， 每次5min；

(g)加入300μL的3％BSA封闭液，37℃1h；PBS清洗3次，每次 5min；

(h)加入一抗，相应蛋白的一抗抗体浓度如下：IQGAP-2蛋白抗体浓 度为1:300，S100A12蛋白的抗体浓度为1:50，APOA2蛋白抗体 浓度为1:300；4℃冰箱放置16h后取出，室温复温15min，然后 PBS洗4次，每次5min；

(i)滴加二抗，所述的二抗为辣根过氧化物酶标记的相应二抗，37℃ 45min；PBS洗4次，每次5min；

(j)PBS洗3次，每次5min；DAB显色2～10min，镜下观察；双蒸 水洗止显色，苏木素复染10s，用自来水冲洗浸泡；

(k)脱水；依次浸泡：75％乙醇:2min；80％乙醇：2min；90％乙醇：2min； 无水乙醇：2min；

(l)用电吹风吹干，加入中性树胶，盖玻片覆盖；

(m)以染色强度和阳性细胞率的得分之和作为判断标准：根据染色 强度分为四级，细胞无染色记0分，弱染色记1分，中等染色记2 分，强染色记3分；根据阳性细胞率也分为四级，0≤阳性细胞率 ≤5％记为0分，5％＜阳性细胞率≤25％记为1分，25％＜阳性细 胞率≤50％记为2分，阳性细胞率＞50％记为3分；上述两项积分 相加，0分为阴性，1～2分为弱阳性，3～4分为中等阳性，5～6 分为强阳性，将阴性和弱阳性定义为低表达，中等阳性和强阳性 则为高表达。