[发明专利]基于氯化物过氧化物酶的工程菌及其实现方法

权利要求书

1.一种氯化物过氧化物酶的工程菌，其特征在于，该工程菌为外源表达氯化物过氧化物酶的大肠杆菌；

所述的胞内氯化物过氧化物酶具体为灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)JSD‐1氯化物过氧化物酶大亚基基因SG‐CP，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；核苷酸序列为825bp，编码274个氨基酸。

2.根据权利要求1所述的工程菌，其特征是，所述的灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)JSD‐1，现保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.5706，保藏日期为2012年1月9日。

3.一种根据权利要求1或2中所述的工程菌的实现方法，其特征在于，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点的引物进行PCR扩增得到氯化物过氧化物酶编码基因；然后将该基因插入大肠杆菌表达载体pET‐22b(+)中得到含有氯化物过氧化物酶编码基因的重组表达载体；再将重组表达载体导入大肠杆菌表达菌株，筛选得到氯化物过氧化物酶的工程菌。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的含有酶切位点的引物包括：

CP‐Nco I‐F:GCCATGGTGCCGTTCGTCACCGCCGGCGAC

CP‐EcoR I‐R:GGAATTCTCAATGATGATGATGATGATGGCTCTCGATGAAGTCGAGCA。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的PCR扩增的条件为：98℃预变性3min；98℃变性10s，68℃延伸45s；30个循环后68℃终延伸3min。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的大肠杆菌表达菌株为Transetta(DE3)大肠杆菌。

7.一种含有上述任一权利要求所述的氯化物过氧化物酶的工程菌及其应用，其特征在于，将其用于氯化物过氧化物酶的体外高效表达，并最终实现木质素的快速降解。