[发明专利]一种板蓝根药材的检测方法

权利要求书

1.一种板蓝根药材的检测方法，其特征在于，该方法包括如下有效成分含量的测定步骤以及农药残留量的测定步骤以及农药残留量的测定步骤，其中，

A：尿苷、鸟苷、腺苷含量的测定包括如下步骤：

(1)分别精密称取鸟苷对照品3.56mg、尿苷对照品4.60mg和腺苷对照品4.49mg，加甲醇制成每1mL分别含22.78μg、29.40μg和含28.74μg的混合对照品溶液；

(2)精密称取板蓝根药材粉末0.5g，精密加入水25mL，超声40分钟；取上清液，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液的制备；

(3)照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以乙腈为流动相A、以水为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：2-20min，A：B为2％：98％→40％：60％；控制柱温为30℃，流量为0.6mL/分钟进行检测，检测波长分别为：0min，254nm；7min，262nm；8min，246nm；10min，259nm；12min，254nm；

分别取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；

B：所述总酸含量的测定包括如下步骤：

(1)精密称取待测板蓝根药材5g，加70％乙醇置水浴上加热回流提取3次，每次50ml且每次回流1.5小时，滤过，60℃时，滤液浓缩至相对密度1.05，浓盐酸调pH至2～3，用乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯至干，加70％乙醇溶解定容至25ml，得到供试品溶液；

(2)总有机酸以水杨酸计，采用直接滴定法测定其总有机酸的含量；

C：所述农药残留量的测定包括如下步骤：

(1)精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每1ml含100μg三苯基磷酸酯的溶液，作为内标贮备液；

分别精密量取各农药对照品贮备溶液1ml及所述内标贮备液1ml，加丙酮定容至100ml，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20-1000ng/ml的不同浓度的溶液，作为混合对照品溶液；

另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每1ml含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山梨醇适量，加水溶解制成每1ml含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶液各1ml混匀，加乙腈定容至10ml，作为分析保护剂；

(2)精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠1g混匀，精密加入丙酮100ml，冰浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有1g无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟；随后精密量取上述溶液60ml减压浓缩至近干，并加入体积比为1：1的环已烷-乙酸乙酯溶液溶解样品并定容至10ml，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为1：1的环已烷-乙酸乙酯溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干；

向上述样品中加入体积比为1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5ml溶解，并转移至石墨碳-氨基混合固相萃取小柱上，以体积比为1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15ml洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，随后加入所述内标贮备液5μl，加乙腈定容至1ml，作为供试品溶液；

(3)精密量取上述各浓度混合对照品溶液及供试品溶液各400μL，并分别加入所述分析保护剂100μL混匀，随后分别精密吸取1μL，进行气相色谱-质谱联用仪测定；其中，

所述气相色谱分析条件为：取规格为30m×0.25mm×0.25um的弹性石英毛细管柱DB17ms，以高纯氦气为载气，柱流速1.3ml/分钟，进样量1μl，采用高压不分流进样，设置进样口温度为230℃，升温程序具体为：初始温度60℃，以30℃/分钟升至120℃、以10℃/分钟升至200℃、以2℃/分钟升至230℃、以30℃/分钟升至300℃，并保持7分钟；

所述EI源质谱测定的条件为：设置电子能量70eV，离子源温度230℃，接口温度250℃。

2.根据权利要求1所述的板蓝根药材的检测方法，其特征在于，所述农药残留量的测定中，所述GPC凝胶渗透色谱净化步骤的条件具体为：填料为Bio-Beads S-X3 200-400目，净化柱为2.5mm×40cm，具体洗脱参数为：净化去杂900s，目标物收集1200s，柱子清洗300s。