[发明专利]一种制备人妊娠特异性糖蛋白9的方法有效
| 申请号： | 201410376676.0 | 申请日： | 2014-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN104151407B | 公开（公告）日： | 2016-11-23 |
| 发明（设计）人： | 杨磊;黄骁舾;王敏 | 申请（专利权）人： | 首都医科大学附属北京朝阳医院 |
| 主分类号： | C07K14/245 | 分类号： | C07K14/245;C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;陈晓庆 |
| 地址： | 100020*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 妊娠 特异性 糖蛋白 方法 | ||
1.一种制备人PSG9蛋白的方法，包括如下步骤：
(1)构建重组菌：将人PSG9蛋白的编码基因导入宿主大肠杆菌中，得到重组菌；
(2)重组菌诱导培养：将重组菌用IPTG进行诱导培养，IPTG在菌液中的浓度为3uM，诱导培养的温度为30℃，得到诱导后菌体；
(3)蛋白纯化：将诱导后菌体破碎，取上清；将上清用镍柱进行纯化，纯化过程中使用的洗脱液是含有40nM咪唑的洗脱缓冲液，收集洗脱液，即得到人PSG9蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述宿主大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述人PSG9蛋白的编码基因如SEQ ID NO.1中第1-1278位核苷酸的DNA分子所示。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述将人PSG9蛋白的编码基因导入宿主大肠杆菌中的方法为：将所述人PSG9蛋白的编码基因插入载体pET-21α-His的多克隆位点，得到重组载体；再将重组载体导入所述宿主大肠杆菌中。
5.一种用于制备人PSG9蛋白的重组菌，是将人PSG9蛋白的编码基因导入宿主大肠杆菌中得到的重组菌。
6.根据权利要求5所述的重组菌，其特征在于：所述宿主大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)。
7.根据权利要求5或6所述的重组菌，其特征在于：所述人PSG9蛋白的编码基因如SEQ ID NO.1中第1-1278位核苷酸的DNA分子所示。
8.根据权利要求5-7任一所述的重组菌，其特征在于：所述将人PSG9蛋白的编码基因导入宿主大肠杆菌中的方法：将所述人PSG9蛋白的编码基因插入载体pET-21α-His的多克隆位点，得到重组载体；再将重组载体导入所述宿主大肠杆菌中。
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