[发明专利]猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒的主要囊膜蛋白和非结构蛋白共表达载体及其构建和表达方法

权利要求书

1.猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒的主要囊膜蛋白和非结构蛋白共表达载体，其特征在于在同一宿主菌中表达的双表达载体pETDuet-1、pRSFDuet-1上分别连接有猪瘟病毒的主要囊膜蛋白E2_c和非结构蛋白NS2-3_c及牛病毒性腹泻病毒的主要囊膜蛋白E2_b和非结构蛋白NS2-3_b的编码基因，双表达载体与编码基因的连接关系为pETDuet-E2_c-NS2-3_c和pRSFDuet-NS2-3_b-E2_b。

2.根据权利要求1的共表达载体，其特征在于宿主菌为大肠杆菌。

3.权利要求1的共表达载体的构建方法，其特征在于包括将猪瘟病毒的主要囊膜蛋白E2_c和非结构蛋白NS2-3_c及牛病毒性腹泻病毒的主要囊膜蛋白E2_b和非结构蛋白NS2-3_b的编码基因连接到双表达载体pETDuet-1、pRSFDuet-1的步骤。

4.根据权利要求3的构建方法，其特征在于具体包括下述步骤：1)扩增猪瘟病毒的主要囊膜蛋白E2_c和非结构蛋白NS2-3_c及牛病毒性腹泻病毒的主要囊膜蛋白E2_b和非结构蛋白NS2-3_b的编码基因；2)利用Nde I酶切pETDuet-1、pRSFDuet-1和pET-32a(+)载体，将酶切后的pETDuet-1、pRSFDuet-1分别与pET-32a(+)载体酶切回收后的Trx-tag序列片段连接得到改造后的pETDuet-1和pRSFDuet-1载体；3)将改造后的pETDuet-1、pRSFDuet-1载体分别进行EcoR I、Pst I双酶切和Pst I、HindIII双酶切，猪瘟病毒的主要囊膜蛋白E2_c编码基因用EcoR I、Pst I双酶切，牛粘膜病毒的非结构蛋白NS2-3_b编码基因用Pst I、Hind III双酶切；将双酶切之后的pETDuet-1、pRSFDuet-1载体分别与双酶切后的猪瘟病毒主要囊膜蛋白E2_c编码基因、牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS2-3_b编码基因连接得到表达载体pETDuet-1-E2_c和pRSFDuet-1-NS2-3_b；4)对步骤3)所得表达载体pETDuet-1-E2_c进行Bgl II、Xho I双酶切，表达载体pRSFDuet-1-NS2-3_b进行Nae I、Xho I双酶切，同时用BglII、Xho I双酶切猪瘟病毒非结构蛋白NS2-3_c编码基因，用Nae I、Xho I双酶切牛病毒性腹泻病毒主要囊膜蛋白E2_b编码基因，将上述双酶切后的表达载体与病毒蛋白编码基因进行连接，构建pETDuet-E2_c-NS2-3_c和pRSFDuet-NS2-3_b-E2_b双表达载体。

5.根据权利要求4的构建方法，其特征在于步骤1)以猪瘟病毒基因组为模版，扩增出主要囊膜蛋白E2_c和非结构蛋白NS2-3_c的编码基因，以牛病毒性腹泻病毒基因组为模版，扩增出主要囊膜蛋白E2_b和非结构蛋白NS2-3_b的编码基因。