[发明专利]一种用REDV多肽修饰的双亲梳型基因载体及制备方法

权利要求书

1.一种用REDV多肽修饰的双亲梳形基因载体，其特征是用式(I)所示：

其中：x+y＝95，x:y＝7:1；

n＝27；

m＝45；

43m1+86m2＝1740；

REDVW是由精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-缬氨酸-色氨酸构成的多肽；

2.权利要求1所述的一种用REDV多肽修饰的双亲梳形基因载体的制备方法，其特征是包括如下步骤：

(1)带苯环基的聚甲基丙烯酸羟乙酯梳型大分子引发剂(II)的制备：

在氮气氛保护下，将甲基丙烯酸羟乙酯，催化剂溴化亚铜和2,2'-联吡啶，以及引发剂1-溴乙基苯加入到溶剂无水丁酮中使溶解，密封后在液氮冷却下，反复进行抽真空、通氮气操作3-5次，在60-80℃反应16-24h得混合液，混合液用二氯甲烷稀释后过硅胶柱或中性氧化铝柱除去未反应的溴化亚铜，然后用冰乙醚沉淀后真空干燥得到式(II)所示的带苯环基的聚甲基丙烯酸羟乙酯梳型大分子引发剂，所述甲基丙烯酸羟乙酯、溴化亚铜、2,2'-联吡啶和1-溴乙基苯的摩尔比为37.0:0.058:0.117:0.073，其中x+y＝95；

(2)疏水性聚酯内核(III)的制备：

在氮气氛保护下，将式(II)所示的大分子引发剂加入到溶剂无水N,N-二甲基甲酰胺或无水二甲基亚砜中使溶解，加入ε-己内酯和起催化作用的辛酸亚锡密封后，反复进行抽真空、通氮气操作3-5次，在110-140℃聚合反应20-26h，冷却到室温，用二氯甲烷或三氯甲烷溶解得到粗产物，粗产物经冰甲醇或冰乙醚沉析、分离，沉淀物真空干燥后得到白色的式(III)所示的疏水性聚酯内核，所述ε-己内酯与式(II)所示的大分子引发剂的摩尔比为(30-45)：1，所述辛酸亚锡与ε-己内酯的摩尔比为1：800，其中：x+y＝95，n＝27；

(3)羧基端疏水性聚酯内核(IV)的制备：

在氮气氛保护下，将式(III)所示的疏水性聚酯内核，丁二酸酐以及催化剂4-二甲氨基吡啶，缚酸剂三乙胺加入到溶剂无水二氧六环或无水吡啶中使溶解，在室温搅拌反应20-35h，在冰甲醇或冰乙醚中沉析得到粗产物，真空干燥，干燥物用N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜溶解，用截留分子量为5000-14000的透析管在蒸馏水中透析48-60h，冷冻干燥，得到白色的羧基端疏水性聚酯内核(IV)，所述(III)所示的疏水性聚酯内核、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶和三乙胺的摩尔比为13.0:976:976:326，其中：x+y＝95，n＝27；

(4)带两种亲水段修饰的梳型聚合物(V)的制备：

在氮气氛保护下，将式(IV)所示的羧基端疏水性聚酯内核、(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基丁二酰亚胺、4-二甲氨基吡啶、分子量为2000的聚乙二醇单甲醚、分子量为1800的支链的聚乙烯亚胺以摩尔比1.22：122：73：49：24.5：67加入到混合溶剂中使溶解，在室温搅拌反应18-28h，用截留分子量为5000-14000的透析管在蒸馏水中透析48-60h，冷冻干燥，得到白色的带两种亲水段修饰的梳型聚合物(V)；其中x+y＝95，x:y＝7:1，n＝27，m＝45,43m1+86m2＝1740；所述混合溶剂由体积比为(1-5)：1的二甲基亚砜和二氯甲烷，或由体积比为(1-5)：1的二甲基亚砜和三氯甲烷组成；

(5)在氮气氛保护下，将60mg的式(V)所示的带两种亲水段修饰的梳型聚合物和7.5mg的分子量为2000的端基为吡啶二硫基和琥珀酰亚胺酯基修饰的异端聚乙二醇，加入到3mLpH＝7.4的0.1mol/L磷酸缓冲溶液和3mL二甲基亚砜的混合溶剂中使溶解，在暗室中于室温下反应2-4h，加入2.63mg CREDVW多肽，室温下反应4-6h，产物用截留分子量为10000的透析管在蒸馏水中透析48-60h，冷冻干燥，得到白色的用REDV多肽修饰的双亲梳形基因载体(I)，所述CREDVW为半胱氨酸-精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-缬氨酸-色氨酸；

反应路线为：

其中：x+y＝95，x:y＝7:1；

n＝27；

m＝45；

43m1+86m2＝1740；

REDVW是由精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-缬氨酸-色氨酸构成的多肽。