[发明专利]一种用REDV多肽修饰的双亲梳型基因载体及制备方法

说明书

本发明公开了一种用REDV多肽修饰的双亲梳型基因载体及制备方法，其制备方法为：(1)带苯环基的聚甲基丙烯酸羟乙酯梳型大分子引发剂(II)的制备；(2)疏水性聚酯内核(III)的制备；(3)羧基端疏水性聚酯内核(IV)的制备；(4)带两种亲水段修饰的梳型聚合物(V)的制备；(5)由式(V)和端基为吡啶二硫基和琥珀酰亚胺酯基修饰的异端聚乙二醇反应，加入CREDVW多肽反应生成用REDV多肽修饰的双亲梳形基因载体(I)，本发明的基因载体可以高效负载基因，REDV多肽可以有效与内皮细胞膜表面的蛋白结合，提高聚合物材料在内皮细胞表面的粘附。同时可以通过荧光的方法检测链接在聚合物表面的多肽含量。

技术领域

本发明涉及一种用REDV多肽修饰的双亲梳形基因载体及制备方法，属于具有生物靶向识别功能的基因载体技术领域。

背景技术

心血管疾病已经成为威胁人类生命的最主要疾病之一。目前对心血管疾病的治疗主要是采用生物支架材料进行人工血管构建。但是随着弹性回缩、内膜增生和血管重构等机制的作用，支架材料术后往往引起再狭窄及血栓的发生，危及患者生命。对植入材料表面实现良好的快速原位内皮化是治疗再狭窄及血栓的有效方法。由于血管内皮细胞具有区别于其他种类细胞的细胞膜表面膜蛋白，因此利用这些特征的细胞表面膜蛋白构建内皮细胞特异性识别支架材料，可以有效促进其在体内的特异性识别和快速粘附、增殖与分化。REDV(精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-缬氨酸)多肽能够与内皮细胞膜表面的α4β1整合素发生特异性的识别作用，使得REDV多肽在内皮细胞中可以有效表达，从而提高支架材料在内皮细胞表面的粘附与增殖。

使用带有荧光活性的多肽，不仅能有效控制支架材料表面的多肽含量，而且为支架材料在体内的示踪、成像提供了可能。

基因治疗是一种通过将目的基因转移入机体的靶细胞而治疗疾病的疗法。采用转基因技术在促进血管材料表面的内皮细胞生长方面的研究越来越受到广泛关注。ZNF580基因的表达可以促进血管内皮生长因子(VEGF)的表达，并使内皮细胞迁移和增殖活性明显增强。目前用于基因递送的载体主要分为病毒类和非病毒类。由于非病毒类载体在性能及安全方面的优势，在实际应用中受到更多青睐。聚乙烯亚胺作为一种非病毒型阳离子基因载体，具有较高的转运能力和转染效率。但是高分子量的聚乙烯亚胺对生物体具有很高的毒性，因此设计多位点的基因载体体系，使之能够有效链接小分子量的聚乙烯亚胺，既能保证有效运载DNA，又能降低体系毒性，是广大基因治疗工作者努力的方向。

聚合物类纳米载体，由疏水性聚酯内核和亲水壳层组成，内核的大小和壳层的长短，都可以通过调节聚合物的分子量得到很好的控制。而且选择生物可降解的高分子聚合物纳米载体，在体内降解过程中不会影响生物体内的微环境，从而不会对生物体产生一系列毒副作用。同时，亲水壳层在体内可以屏蔽多余的正电荷，有效促进DNA从溶酶体中解离出来，使其具有较高的转染效率。

发明内容

本发明的目的是在提供一种具有转染活性高，生物靶向识别性能好，生物降解性能佳，生物毒性低，体外检测快捷方便的用REDV多肽修饰的双亲梳形基因载体。

本发明的第二个目的是提供一种用REDV多肽修饰的双亲梳形基因载体的制备方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种用REDV多肽修饰的双亲梳形基因载体，是用式(I)所示：

其中：x+y＝10-114，x:y＝(1-7):1；

n＝27-40；

m＝45-114；

43m1+86m2＝1740；

REDVW是由精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-缬氨酸-色氨酸构成的多肽；