[发明专利]一种通过改善细胞通透性生产L(+)-酒石酸的方法在审
| 申请号： | 201410379113.7 | 申请日： | 2014-08-04 |
| 公开（公告）号： | CN104140984A | 公开（公告）日： | 2014-11-12 |
| 发明（设计）人： | 张建国;潘海峰;谢志鹏;鲍文娜 | 申请（专利权）人： | 杭州宝晶生物股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P7/46 | 分类号： | C12P7/46;C12R1/01 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 陈昱彤 |
| 地址： | 311106 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通过 改善 细胞 通透 生产 酒石酸 方法 | ||
1.一种通过改善细胞通透性生产L(+)-酒石酸的方法，其特征在于,包括如下步骤：（1）发酵培养表达顺式环氧琥珀酸水解酶的重组细胞；（2）使用曲拉通系列表面活性剂作为通透剂对所述重组细胞进行通透化处理；（3）利用通透化处理过的重组细胞来生产L(+)-酒石酸。
2.根据权利要求1所述的通过改善细胞通透性生产L(+)-酒石酸的方法，其特征在于：在利用通透化处理过的重组细胞生产L(+)-酒石酸之前，先将该通透化处理过的重组细胞使用κ-卡拉胶固定化。
3. 根据权利要求2所述的通过改善细胞通透性生产L(+)-酒石酸的方法，其特征在于，将通透化处理过的重组细胞使用κ-卡拉胶固定化的方法如下：
将通透化处理过的重组细胞悬液加入κ-卡拉胶溶液中混匀，冷却凝固后用氯化钾溶液浸泡固定，其中，κ-卡拉胶的终浓度为20-60g/l，通透化处理过的重组细胞的终浓度为10-50g/l。
4. 根据权利要求3所述的通过改善细胞通透性生产L(+)-酒石酸的方法，其特征在于：所述κ-卡拉胶的终浓度为30-50g/l，通透化处理过的重组细胞的终浓度为20-30g/l。
5.根据权利要求1或2所述的通过改善细胞通透性生产L(+)-酒石酸的方法，其特征在于，在所述步骤（2）中，对所述重组细胞进行通透化处理的方法为：将步骤（1）所培养的重组细胞用含有曲拉通系列表面活性剂的生理盐水悬浮，所述表面活性剂的作用浓度为0.01 - 50 g/L；然后静置或慢速搅拌悬浮液10 min - 24 h。
6. 根据权利要求5所述的通过改善细胞通透性生产L(+)-酒石酸的方法，其特征在于：所述表面活性剂的作用浓度为0.1 - 10 g/L，静置或慢速搅拌悬浮液30 min - 5 h。
7.根据权利要求1或2所述的通过改善细胞通透性生产L(+)-酒石酸的方法，其特征在于：所述表面活性剂为非离子表面活性剂。
8. 根据权利要求7所述的通过改善细胞通透性生产L(+)-酒石酸的方法，其特征在于，所述非离子表面活性剂为失水山梨醇脂肪酸酯系列表面活性剂、聚山梨酯系列表面活性剂、聚乙二醇对异辛基苯基醚系列表面活性剂、烷基酚聚氧乙烯醚系列表面活性剂或月桂醇聚氧乙烯醚系列表面活性剂。
9. 根据权利要求8所述的通过改善细胞通透性生产L(+)-酒石酸的方法，其特征在于：所述非离子表面活性剂为曲拉通X-100。
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