[发明专利]鉴定或辅助鉴定小麦抗寒性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及鉴定或辅助鉴定小麦抗寒性的方法。

背景技术

严重影响小麦生产的低温冻害分冬季冻害和春季冻害(冷害)两大类。小麦春季冻害难以预测，在花粉母细胞减数分裂期，曾有温度仅降至6℃也发生严重不结实的记录，品种间对春季冻害的反应差异不明显，只是不同品种受冻后的恢复速度与恢复程度存在明显差异，在生产上主要通过栽培技术措施加以预防和补救。但小麦品种对冬季冻害的抗性(称为抗寒性或越冬性)，品种间有明显差异，生产上可以通过培育新品种的抗寒性加以预防。

小麦因对温度高低和日照长短的反应以及生长发育快慢程度的不同被分为冬性、弱(半)冬性和春性品种。其中对温度的反应被称为春化反应，是小麦对寒冬条件的一种适应，它在幼穗发育前要求有一定时间的低温，客观上使这个对外部条件敏感的发育过程延迟到春季温度上升时才开始，从而避开了严寒危害。小麦品种之间的光照反应和早晚熟程度差异也是明显的，这些差异与不同春化反应结合在一起，在不同地区形成了多种多样的气候生态类型。

仅从遗传学角度来看，目前公认的春化有关基因有5个,分别定名为：Vrn1、Vrn2、Vrn3、Vrn4和Vrn5，前3个基因合称VRN-1，分别定位在5A、5B和5D染色体长臂上。其中，Vrn1对温度敏感性影响最大，并对其它春化基因具有上位性效应，而Vrn5影响最小。Sutka和Snape(1989)曾将命名为“Fr1”的耐冻基因定位在5A染色体上，与Vrn1位置相同，他们同时又认为该基因可能是Vrn1基因的多效性或两者之间的紧密连锁。Distelfeld等(2009)的研究报道提供了上述工作的分子生物学依据(Curr Opin Plant Biol,2009,12:1–7)。Dhillon等(2010)在美国和匈牙利比较了VRN-1基因对不同程度冬季严寒的反应，结果表明Vrn-1等位变异足以决定耐冻性的差异，说明过去作图的耐冻性基因可能是Vrn-1的多态性效应，而不是像Sutka和Snape (1989)提出的那种独立紧密连锁位点的效应(Regulation of freezing tolerance and flowering in temperate cereals:The VRN-1connection.Plant Physiol,2010,153:1846–1858)。Galiba等(2009)的研究也表明，春化与冷适应调节的基因网络是互相联系的(Regulatory genes involved in the determination of frost tolerance in temperate cereals.Plant Sci,2009,176:12–19)。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于鉴定待测小麦抗寒还是不抗寒的引物组合物。

本发明提供的组合物，由单独使用的引物对1、引物对2、引物对3、引物对4、引物对5、引物对6、引物对7、引物对8和引物对9组成；

所述引物对1由序列表中序列1所示的单链DNA分子361S-F和序列表中序列2所示的单链DNA分子VA1-R组成；

所述引物对2由序列表中序列3所示的单链DNA分子361W-F和序列表中序列2所示的单链DNA分子VA1-R组成；

所述引物对3由序列表中序列4所示的单链DNA分子VRN1AF和序列表中序列5所示的单链DNA分子VRN1-INT1R组成；

所述引物对4由序列表中序列6所示的单链DNA分子Intr1/A/F2和序列表中序列7所示的单链DNA分子Intr1/A/R3组成；

所述引物对5由序列表中序列8所示的单链DNA分子Intr1/C/F和序列表中序列9所示的单链DNA分子Intr1/AB/R组成；

所述引物对6由序列表中序列10所示的单链DNA分子Intr1/B/F和序列表中序列11所示的单链DNA分子Intr1/B/R3组成；

所述引物对7由序列表中序列10所示的单链DNA分子Intr1/B/F和序列表中序列12所示的单链DNA分子Intr1/B/R4组成；

所述引物对8由序列表中序列13所示的单链DNA分子Intr1/D/F和序列表中序列14所示的单链DNA分子Intr1/D/R3组成；

所述引物对9由序列表中序列13所示的单链DNA分子Intr1/D/F和序列表中序列15所示的单链DNA分子Intr1/D/R4组成。