[发明专利]一种水稻种胚RNA的提取方法

权利要求书

1.一种水稻种胚RNA的提取方法，步骤如下：

(1)将10粒种子剥胚，将胚装入EP管中，立即加入200ulTripure，用尖头玻璃棒快速捅碎，加入800ulTripure，迅速快速颠倒振荡30s以上，室温静置10min；

(2)加入200ul的氯仿，颠倒振荡使两相充分混合，室温静置10min；

(3)4℃12000g离心10min，吸取上清约450ul加入等量冰异丙醇，轻轻颠倒振荡充分混合，室温静置10min；

(4)4℃12000g离心15min，弃上清并加入1ml75％乙醇，轻轻吹打沉淀，使之飘起，4℃12000g离心3min，弃上清；

(5)重复(4)，500ul乙醇即可；

(6)将空管12000g离心2min，吸干余液，放置大约30s，立即加入30-60ulRNase-freewater，轻轻吹打数次，使沉淀溶解，随后水浴65℃5min使其充分溶解并打开二级结构；

(7)如果RNA不立即使用，步骤6加入乙醇后，放置－20℃保存，待用时，取出4℃离心后弃上清进行步骤6；

(8)溶解的RNA最好立即测定OD，用1xTBE配制1％琼脂糖电泳220v11min跑电泳，操作必需在冰上进行，RNA可保存在－20℃短期保存或-80℃长期保存，如果RNA重新冻融必须吹打混匀后进行后续实验。

2.根据权利要去1所述的种胚RNA的提取方法，其特征在于：水稻种胚未浸泡或者浸泡处理均可。