[发明专利]解淀粉芽孢杆菌WZZ002及应用

权利要求书

1.解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)WZZ002，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号CCTCC M 2013366，保藏日期2013年8月8日。

2.一种权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌WZZ002在拆分N-叔丁氧羰基-DL-氨基酸酯中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用为：以解淀粉芽孢杆菌WZZ002经发酵培养获得的湿菌体冻干后的干菌体为催化剂，以外消旋N-叔丁氧羰基-DL-氨基酸酯为底物，于pH值为6～9的磷酸缓冲液中，在20～50℃下进行转化反应，反应结束后，将反应液后处理，获得N-叔丁氧羰基-D-氨基酸酯和N-叔丁氧羰基-L-氨基酸。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述干菌体的质量用量为1～50g/L缓冲液，所述底物的初始浓度为1～200g/L缓冲液。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述底物为N-叔丁氧羰基-DL-丙氨酸酯、N-叔丁氧羰基-DL-2-氨基丁酸酯、N-叔丁氧羰基-DL-正缬氨酸酯、N-叔丁氧羰基-DL-蛋氨酸酯、N-叔丁氧羰基-DL-脯氨酸酯、N-叔丁氧羰基-DL-丝氨酸酯、N-叔丁氧羰基-DL-亮氨酸酯、N-叔丁氧羰基-DL-异亮氨酸酯、N-叔丁氧羰基-DL-苏氨酸酯、N-叔丁氧羰基-DL-色氨酸酯或N-叔丁氧羰基-DL-苯丙氨酸酯。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述催化剂按如下方法制备：

(1)斜面培养

将解淀粉芽孢杆菌WZZ002接种至斜面培养基，在30℃培养24h，获得斜面菌落；斜面培养基终浓度组成：NaNO₃3.0g/L，KH₂PO₄1.0g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，KCl0.5g/L，FeSO₄·7H₂O0.01g/L，Boc-DL-丙氨酸酯10mmol/L，溶剂为去离子水，pH7.0；

(2)种子培养

将步骤(1)获得的斜面菌落接种于种子培养基，在30℃、200r/min培养24h，获得种子液；种子培养基终浓度组成：蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/L，酵母膏1g/L，麦芽糖5g/L，NaCl0.5g/L，琼脂23g/L，溶剂为去离子水，pH7.0；

(3)发酵培养

在无菌条件下，将种子液以体积浓度5～20％的接种量接种于发酵培养基中，30℃、200r/min培养24h，获得发酵液，将发酵液离心，弃上清液，得到解淀粉芽孢杆菌WZZ002湿菌体，将湿菌体悬浮于pH7.0、0.2mol/L的磷酸盐缓冲液中，搅拌均匀，冷冻干燥，得到干菌体；发酵培养基组成为：蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/L，酵母膏1g/L，MgSO₄1mmol/L，溶剂为去离子水，pH7.0。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述反应液后处理的方法为：转化反应完全后，将转化反应液过滤除去菌体，滤液用有机溶剂萃取，分别获得有机相和水相，有机相减压蒸馏除去溶剂，获得N-叔丁氧羰基-D-氨基酸酯；所述有机溶剂为正己烷、环己烷或乙酸乙酯；水相调pH值至2.0后，用萃取剂萃取，取萃取后的有机相得到N-叔丁氧羰基-L-氨基酸，所述萃取剂为正己烷、环己烷或乙酸乙酯。