[发明专利]一种区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法

权利要求书

1.一种区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法，其特征在于,包括如下步骤：

a.提取样品DNA溶液：采用快捷型植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取，得到样品DNA溶液；

b.获取样品DNA条形码序列：以步骤a提取的DNA溶液为模板，按照预定的PCR体系在预定的循环程序下，ITS序列采用正向引物

(5'-CGTAACAAGGTTTCCGTAGGT-3')和反向引物

(5'-TGGTTCACGGGATTCTGC-3')进行PCR扩增；Trn-L序列采用正向引物

(5'-CGAAATCGGTAGACGCTACG-3')，和反向引物

(5'-GGGGATAGAGGGACTTGAAC-3')进行PCR扩增；Matk序列采用采用正向引物(5'-TAATTTACGATCAATTCATTC-3')和反向引物

(5'-GTTCTAGCACAAGAAAGTCG-3')进行PCR扩增，即得到样品的DNA条形码序列；将PCR扩增产物采用1.5％琼脂糖凝胶电泳分离，目标条带回收，进行测序，将测序所得到的ABI序列文件用DNAMAN软件进行拼接和人工校正，得到ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列；

c.将样品的ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列与参照序列进行对比，判别样品所属。

2.根据权利要求1所述的一种区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法，其特征在于，所述步骤b的PCR体系为：

3.根据权利要求1所述的一种区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法，其特征在于,所述步骤b的循环程序为：①95℃预变性5min；②95℃变性30s，55/50℃复性30s(ITS/Trn基因扩增采用55℃，MatK基因采用50℃)，72℃延伸45s，30个循环；③72℃延伸10min。产物4℃冰箱短期保存或-20℃冰箱长期保存。4.根据权利要求1所述的一种区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法，其特征在于，在步骤b前还包括DNA质量和浓度检测步骤b₀：

取2μL DNA溶液，加入2μL 6×Loading buffer和6μL ddH₂O混匀，上样；电泳缓冲液1×TBE、1％琼脂糖凝胶上进行电泳检测，电泳结束后，在凝胶成像分析系统上，观察、拍照；

将待检样本总DNA溶液，按一定的比例稀释，用UV-2800紫外分光光度计，测定样本总DNA在紫外波长为260和280nm处的吸收值；依据OD₂₆₀和OD₂₈₀值，判断待检样本总DNA的纯度；待检样本总DNA的纯度(μg·mL^-1)＝OD₂₆₀/0.02×L×稀释倍数＝OD₂₆₀×50μg·mL^-1×稀释倍数，其中L为比色皿光经1cm，OD₂₆₀为260nm波长处的光吸收值，0.02为每mL溶液内含有1μg DNA钠盐时的光吸收值。