[发明专利]一种区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法。

背景技术

蕨麻是鹅绒委陵菜(Potentilla anserina L.)的变种的块根。蕨麻富含淀粉、蛋白质、矿质元素、皂苷、总黄酮等营养成分和活性物质，具有较好的营养和药用价值，质糯，味甜，口感佳，是我国医典中记载的药食兼用的民族食品；鹅绒委陵菜地下部分不膨大，常常作为饲料和地被植物使用，不能食用。两者的用途差异大，表型形态却非常接近，差别不明显，还有较多过渡种。鹅绒委陵菜和蕨麻一直是从形态水平上进行分类的，难以区别，经常造成分类困难，因此，利用分子技术对其进行分类具有重要的现实意义。

发明内容

为了解决上述区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法的缺点，本发明公开一种区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法，本发明采用如下技术方案来解决上述技术问题：

一种区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法，其特征在于,包括如下步骤：

a.提取样品DNA溶液：采用快捷型植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取，得到样品DNA溶液；

b.获取样品DNA条形码序列：以步骤a提取的DNA溶液为模板，按照预定的PCR体系在预定的循环程序下，ITS序列采用正向引物(5'-CGTAACAAGGTTTCCGTAGGT-3')和反向引物(5'-TGGTTCACGGGATTCTGC-3')进行PCR扩增；Trn-L序列采用正向引物(5'-CGAAATCGGTAGACGCTACG-3')，和反向引物(5'-GGGGATAGAGGGACTTGAAC-3')进行PCR扩增；Matk序列采用采用正向引物(5'-TAATTTACGATCAATTCATTC-3')和反向引物(5'-GTTCTAGCACAAGAAAGTCG-3')进行PCR扩增，即得到样品的DNA条形码序列；将PCR扩增产物采用1.5％琼脂糖凝胶电泳分离，目标条带回收，进行测序，将测序所得到的ABI序列文件用DNAMAN软件进行拼接和人工校正，得到ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列。

c.将样品的ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列与参照序列进行对比，判别样品所属。

优选的，在上述的一种区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法中，所述步骤b的PCR体系为：

优选的，在上述的一种区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法中，所述步骤b的循环程序为：①95℃预变性5min；②95℃变性30s，55/50℃复性30s(ITS/Trn基因扩增采用55℃，MatK基因采用50℃)，72℃延伸45s，30个循环；③72℃延伸10min。产物4℃冰箱短期保存或-20℃冰箱长期保存。

优选的，在上述的一种区分蕨麻和鹅绒委陵菜的方法中，在步骤b前还包括DNA质量和浓度检测步骤b₀：

取2μL DNA溶液，加入2μL 6×Loading buffer和6μL ddH₂O混匀，上样；电泳缓冲液1×TBE、1％琼脂糖凝胶上进行电泳检测，电泳结束后，在凝胶成像分析系统上，观察、拍照；

将待检样本总DNA溶液，按一定的比例稀释，用UV-2800紫外分光光度计，测定样本总DNA在紫外波长为260和280nm处的吸收值；依据OD₂₆₀和OD₂₈₀值，判断待检样本总DNA的纯度；待检样本总DNA的纯度(μg·mL^-1)＝OD₂₆₀/0.02×L×稀释倍数＝OD₂₆₀×50μg·mL^-1×稀释倍数，其中L为比色皿光经1cm，OD₂₆₀为260nm波长处的光吸收值，0.02为每mL溶液内含有1μg DNA钠盐时的光吸收值。

与现有技术相比，本发明具有如下技术效果：

采用本发明的设计方案，使用DNA鉴定技术对蕨麻和鹅绒委陵菜在分子水平进行鉴定，准确率高，结果可靠。

具体实施方式

下面对本发明作进一步详细说明，但是本发明不仅仅局限于以下实施例。

实施例1

1.实验材料

总共选取了来自全国的蕨麻材料样本共129个，甘肃11个，青海海东2个，其中青海玉树20个，青海果洛20个，青海海南12个，青海海北8个，，西藏56个；选取鹅绒委陵菜共43个，甘肃5个，青海海东12个，青海海西共6个，海南5个，海北7个，东北8个。

2.试验方法

(1)DNA模板的制备