[发明专利]一种抗传染性脾肾坏死病毒的病毒样颗粒和疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种抗传染性脾肾坏死病毒的病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒由同时表达的流感病毒基质蛋白M1和融合蛋白HA-24构成；所述融合蛋白HA-24由流感病毒HA蛋白与鱼类传染性脾肾坏死病毒ORF24构建而成，所述融合蛋白HA-24的核酸序列如SEQ ID NO:3、5、7、9或11所示。

2.一种抗传染性脾肾坏死病毒的病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

①将传染性脾肾坏死病毒主要结构蛋白ORF24基因替换流感病毒HA基因的一部分，二者构成融合基因HA-24，融合基因HA-24的核酸序列如SEQ ID NO:3、5、7、9或11所示；

②将流感病毒的基质蛋白M1基因和融合蛋白HA-24基因插入昆虫杆状病毒pFastBac-Dual载体上，经酶切鉴定及测序，筛选出阳性重组载体，并转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞，获得重组杆状病毒穿梭载体rBacmid；

③利用脂质体转染试剂，将含外源基因的重组杆状病毒穿梭载体rBacmid转染入宿主昆虫细胞株sf-9中，获得重组昆虫杆状病毒；

④培养受重组昆虫杆状病毒转染的宿主昆虫细胞，使其得以高效地表达流感病毒的结构蛋白M1和融合蛋白HA-24，并自动组装成同时表达流感病毒基质蛋白M1和融合蛋白HA-24的病毒样颗粒。

3.根据权利要求2所述的流感病毒和传染性脾肾坏死病毒的病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤①中的HA-24基因是由传染性脾肾坏死病毒ORF24与流感病毒HA基因先合成融合基因，然后用PCR扩增而成。

4.根据权利要求2所述的流感病毒和传染性脾肾坏死病毒的病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤③中sf-9细胞在27℃培养4-5天，收集细胞培养上清液，再侵染新的sf-9细胞，获得放大后高滴度的重组昆虫杆状病毒。

5.根据权利要求2所述的流感病毒和传染性脾肾坏死病毒的病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤④中受重组昆虫杆状病毒转染的宿主昆虫细胞在27℃培养3天，表达的流感病毒M1蛋白和融合蛋白HA-24，自动组装成VLPs。

6.一种包含权利要求1-5任一项所述的病毒样颗粒的鱼类传染性脾肾坏死病毒基因工程疫苗。