[发明专利]一种河蚬抗氧化肽及其制备方法

权利要求书

1.一种河蚬抗氧化肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）微波协同复合酶协同酶解河蚬肉，得酶解物；

（2）超滤去除酶解物中大分子蛋白；

（3）将滤过液依次通过葡萄糖凝胶G-50和G-25进行分离纯化，冷冻干燥，即得；

步骤（1）具体为：取新鲜河蚬肉，或速冻河蚬肉经流水解冻沥干后，按重量比1:4的料液比加水，采用低温超高压连续流细胞破碎仪进行匀浆，调节pH至6.8～7.2，添加河蚬肉质量的1.0% ~1.2%复合蛋白酶，在微波功率800W，55~60℃条件下酶解25~30min，酶解完成后100℃下灭酶15 ~20min，冷却到室温，4000r/min 离心20~25min，取上清液，得酶解物；

所述的复合蛋白酶为中性蛋白酶与风味蛋白酶按质量比2~3:1得到的混合物；

步骤（2）采用超滤膜切割分子量为3KD的杯式过滤器过滤；步骤（3）具体为：

将步骤（2）得到的滤过液通过装有葡聚糖凝胶G-50的玻璃层析柱，以蒸馏水为洗脱液，流速为0.5~1mL/min，通过自动部分收集器分管收集，每5min 收集一管，每管3mL，分别测定毎管的A280nm值，以管数为横坐标，毎管的A280nm值为纵坐标作图，得到含有5个峰值的洗脱曲线，合并同一分离峰的洗脱液，得到5个不同的组分，将总抗氧化能力最强的组分继续通过装有葡聚糖凝胶G-25的玻璃层析柱，以蒸馏水为洗脱液，流速为0.5~1mL/min，通过自动部分收集器分管收集，每5min 收集一管，每管3mL，分别测定每管的A_280nm值，以管数为横坐标，每管的A_280nm值为纵坐标作图，得到含有3个峰值的洗脱曲线，合并同一分离峰的洗脱液，得到3个不同的组分；分别测定3个组分羟自由基清除能力和DPPH自由基清除能力，收集清除自由基能力最强的洗脱液组分冷冻干燥，即为河蚬抗氧化肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的玻璃层析柱为Ф2.0×100cm，洗脱液的体积为4BV。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述的冷冻干燥为：在真空度为5 ~ 10Pa，温度为-51 ~ -53℃的条件下进行真空冷冻干燥10~12h。

4.权利要求1-3任一方法所制备的河蚬抗氧化肽。