[发明专利]一种河蚬抗氧化肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种河蚬抗氧化肽及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

河蚬，学名(corbicula fluminea)，又称黄蚬、金蚶、扁螺等，是双壳类软体动物，是我国重要的经济贝类之一。河蚬含有丰富的蛋白质（干样中粗蛋白含量达60%以上）、糖原、必需氨基酸、牛磺酸、多种维生素、以及钙、磷、铁、硒等具有特殊生理作用的矿物质，还含有活性肽等生理活性物质。

近年来，从水产蛋白中提取抗氧化活性肽的研究也逐渐展开，如已从鳞鱼、鲭鱼、巨鱿鱼皮、白虾头和黄鳍金枪鱼骨架蛋白中提取出具有显著抗氧化活性的肽段，这充分证明水产品中的优质蛋白具有制备抗氧化肽的潜力。

天然抗氧化肽是继化学性抗氧化物质如BHA、BHT、PG等和天然抗氧化活性物质如茶多酚、VC、类胡萝卜素等之后的一种新型外源性抗氧化剂，其对清除人体内自由基、抑制人体衰老具有良好的效果，而且安全无毒。抗氧化肽不仅分子质量小、容易被人体吸收，而且还有易溶解、低黏度、不易形成凝胶等良好的功能特性，故抗氧化肽正作为一种新兴抗氧化剂而逐渐受到人们推崇。

目前，河蚬资源的利用仅局限在鲜食，制成蚬干、咸蚬和罐头等粗加工方面，附加值低。

中国申请CN 102160594A公开了一种河蚬蛋白粉及其制作方法,所述方法包括以下步骤:河蚬肉清洁;绞碎成河蚬肉糜;内源酶和外源酶协同水解;灭酶;添加绿茶粉和活性炭脱色除臭;膜过滤;减压浓缩;离心喷雾干燥。该方法所得的河蚬蛋白粉,适当利用河蚬内源酶分解河蚬软体组织蛋白,结合加入外源生物酶,降低蛋白粉的苦味,提高水解度,减少了外源酶的消耗,所制备的河蚬蛋白粉,容易消化,无腥臭苦味。但上述技术方案存在酶解不充分，所得河蚬抗氧化肽的活性不高的缺陷。

因此，依然有待提出改进河蚬抗氧化肽的制备方法。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种河蚬抗氧化肽的制备方法，通过利用复合酶微波协同可控酶解技术对河蚬肉进行深度开发，制备出新型且具有抗氧化功效的河蚬抗氧化肽，不仅可提高河蚬资源的利用率，为河蚬的深度加工提供一条新的途径，提升河蚬附加值，促进农民增收，同时在促进河蚬养殖业的发展方面将取得更好的社会和经济效益。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种河蚬抗氧化肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）微波协同复合酶协同酶解河蚬肉，得酶解物；

（2）超滤去除酶解物中大分子蛋白；

（3）将滤过液依次通过葡萄糖凝胶G-50和G-25进行分离纯化，冷冻干燥，即得。

其中，步骤（1）具体为：取新鲜河蚬肉或速冻河蚬肉经流水解冻沥干后，按1:2-1:6(w/w)的料液比加水，进行匀浆，调节pH至6～8，添加河蚬肉质量的0.7% ~1.5%复合蛋白酶，在微波功率700~900W，55~60℃条件下酶解20~35min，酶解完成后灭酶， 离心，取上清液，得酶解物。

优选步骤（1）具体为：取新鲜河蚬肉，或速冻河蚬肉经流水解冻沥干后，按1:4(w/w)的料液比加水，采用低温超高压连续流细胞破碎仪进行匀浆，调节pH至6.8～7.2，添加河蚬肉质量的1.0% ~1.2%复合蛋白酶，在微波功率800W，55~60℃条件下酶解25~30min，酶解完成后100℃下灭酶15 ~20min，冷却到室温，4000r/min 离心20~25min，取上清液，得酶解物。

其中，所述的复合蛋白酶为中性蛋白酶与风味蛋白酶按质量比2~3:1，优选2:1得到的混合物。所述的中性蛋白酶可采用现有技术公开的多种中性蛋白酶，包括但并不局限于中性蛋白酶（NOVO分装，CAS:9068-59-1 ACT:200000u/g EXP:11/2014 上海奥宇生物科技有限公司）。风味蛋白酶同样可采用现有技术公开的多种，包括但并不局限于、风味蛋白酶（NOVO分装，ACT:15000u/g EXP:08/2014 上海奥宇生物科技有限公司），中性蛋白酶属于一种内切酶，具有一定的切割位点；针对一些应用的实际性会复配出复合蛋白酶等，切割位点更广谱，达到完全分解的更理想效果，而风味蛋白酶，在更精细定位切割位点的情况下，分解出一些具风味的氨基酸或肽。中性蛋白酶与风味蛋白酶按质量比2~3:1进行酶解，是经过不同酶种类筛选试验，发现采用该比例范围内这两种酶对河蚬进行酶解得到的产物其总抗氧化能力较强，再将这两种酶按不同比例复配进行单因素试验，得到中性蛋白酶与风味蛋白酶按质量比2:1进行酶解，酶解产物的总抗氧化能力最强。