[发明专利]一种体外细胞接触式共培养装置及其培养操作方法

权利要求书

1.一种体外细胞接触式共培养装置，由培养盒体、盒底及盒盖组成，其特征在于：所述培养盒体（2）的底端设有盒底（1），盒体的上端设有盒盖（3），培养盒体内设有细胞培养槽（5）。

2.根据权利要求1所述的体外细胞接触式共培养装置，其特征在于：所述的培养盒体为圆锥陀螺形，其上端的直径大于底端的直径，细胞培养槽为圆桶形，圆桶的上下直径与培养盒体的盒底相同，细胞培养槽的中部设有隔离膜（4），隔离膜为一具有通透性能的聚碳酸酯膜，隔离膜固定于培养槽的中部，将培养槽分隔为上下两个培养槽。

3.根据权利要求1或2所述的共培养装置的培养操作方法，其特征在于：它包括下列步骤：

（1）向C2C12细胞培养瓶中加入1ml浓度为0.25%胰蛋白酶液消化细胞，再加入浓度为10%胎牛血清的高糖DMEM液体培养基5ml，用胶头滴管搅拌混合均匀，然后将混合液移入10ml离心管中，在离心机上离心5min，弃上清液，离心机转速为1500转/min，使其配制成浓度为3×10⁴个/ml细胞悬液；

（2）将配制好的细胞悬液置入细胞培养槽内的隔离膜的上侧，在隔离膜上侧的细胞悬液中接种C2C12成肌细胞悬液，将细胞培养槽置于细胞培养盒中，盖上细胞培养盒盖，放在超净工作台上缓慢摇晃以混匀细胞，然后将细胞培养盒放在37℃的恒温培养箱中孵育，待24-48小时后，细胞贴壁增殖成单层细胞后，粘附在隔离膜上壁上；

（3）将余下的培养液用吸液枪吸出打到废液缸后，把细胞培养槽反转过来，倒置于细胞培养盒内，使贴壁的C2C12细胞翻转在隔离膜的下侧面；

（4）按照上述同样的方法将1.5g碳酸氢钠、4.5g葡萄糖混合离心后，用浓度10%胎牛血清的高糖DMEM液体培养基5ml，将其配制成浓度为4×10⁵个/ml细胞悬液；

（5）将配制好的细胞悬液置入细胞培养槽隔离膜的上侧，在隔离膜上侧的细胞悬液中接种3T3-L成纤维细胞，这样就形成了在细胞培养槽的聚碳酸脂膜下侧接种C2C12细胞，上侧接种3T3-L细胞的细胞直接接触式共培养状态；

（6）将此装置放入37℃的恒温培养箱内孵育，每隔一天为两种细胞换液1次。