[发明专利]囊胚培养液及其制备方法

权利要求书

1.囊胚培养液，其特征在于，包含对受精卵进行处理培养的组合物、杀菌剂。

2.根据权利要求1所述的囊胚培养液，其特征在于，所述杀菌剂为庆大霉素，浓度9.5-10.5mg/L。

3.根据权利要求1所述的囊胚培养液，其特征在于，所述组合物中包含氯化钠90.25-99.75mmol/L，氯化钾2.375-2.625 mmol/L，磷酸二氢钾0.333-0.368mmol/L，硫酸镁0.19-0.21mmol/L，葡萄糖3.04-3.36mmol/L，氯化钙1.615-1.785 mmol/L，乳酸钠1.418-1.567g/L，丙酮酸钠0.095-0.105mmol/L，碳酸氢钠23.75-26.25mmol/L，丙氨酰谷氨酰胺0.95-1.05mmol/L，牛磺酸0.38-0.42mmol/L，4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES 2.375-2.625mmol/L，非必需氨基酸0.95-1.05%，v/v，必需氨基酸1.9-2.1% ，v/v，维生素0.95-1.05%, v/v，庆大霉素 9.5-10.5mg/L。

4.根据权利要求3所述的囊胚培养液，其特征在于，所述非必需氨基酸为L-丙氨酸、 L-天冬酰胺、 L-天冬氨酸 、 L-谷氨酸、甘氨酸、 L-脯氨酸、 L-丝氨酸中的一种或者几种。

5.根据权利要求3所述的囊胚培养液，其特征在于，所述必需氨基酸为L-精氨酸、L-胱氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、苯L-丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸中的一种或者几种。

6.根据权利要求3所述的囊胚培养液，其特征在于，所述维生素为氯化胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、D-泛酸、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫氨酸中的一种或者几种。

7.根据权利要求1所述的囊胚培养液，其特征在于，囊胚培养液的溶剂采用超纯水。

8.根据权利要求1-7任一项所述的囊胚培养液，其特征在于，所述培养液中选择性添加指示剂酚红，浓度4.75-5.25mg/L。

9.根据权利要求1-7任一项所述的囊胚培养液，其特征在于，所述培养液中含有人血清白蛋白9.5-10.5%，v/v，可在使用时添加或分装前添加。

10.制备权利要求1-9所述的囊胚培养液的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）基础液的配制  

a、先按照比例称量各组分，并分开放置；

b、先将除杀菌剂、选择性添加指示剂、碳酸氢钠、人血清白蛋白外的称量好的组分溶于称量好的超纯水中；

c、向步骤b所得溶液中加入称量好的杀菌剂、选择性添加指示剂和碳酸氢钠；

d、将配置好的基础液放置37℃、5.5%的CO₂培养箱中平衡6-12小时； 

（2）囊胚培养液的原液配制 

a、将囊胚培养液的基础液在超净工作台下利用0.2μm的滤膜过滤除菌，得到滤液A；

 b、在滤液A中加入人血清白蛋白，震荡或搅拌混合均匀，得到囊胚培养液的原液；或者省略该步骤，将滤液A作为囊胚培养液的原液，医生使用时添加人血清白蛋白；

（3）囊胚培养液原液的处理

在无菌环境下对囊胚培养液原液进行分装封口，得到囊胚培养液，将其放置冰箱或冷库内保存；

（4）囊胚培养液的检测

检测项目是pH值、渗透压、细胞毒性、皮内刺激、致敏、无菌、热原、细菌内毒素、体外鼠胚试验来判断囊胚培养液是否合格。