[发明专利]囊胚培养液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及人工辅助生殖技术，尤其涉及一种囊胚培养液及其制备方法。

背景技术

囊胚培养液对胚胎的发育培养已广泛应用于试管婴儿技术中。囊胚培养液的目的是：一是提供胚胎存活并发育的营养物质；二是为胚胎的生存提供必要的环境。囊胚培养液的用途：实验室或临床在二氧化碳环境下对体外囊胚提供分裂发育的营养物质及必要环境。

目前，我国辅助生殖技术中的囊胚培养液依赖进口成品，成本高且溶液的有效性的好坏不能很好的表现，如果在培养液变质后仍继续使用将对实验或临床操作造成不可逆转的结果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种各项指标达到体外培养液的标准使用安全，易于判断培养液是否变质的囊胚培养液，为辅助生殖技术提供有力保证。

本发明的囊胚培养液，包含对受精卵进行处理培养的组合物、杀菌剂。

所述杀菌剂为庆大霉素，浓度9.5-10.5mg/L。

所述组合物中包含氯化钠90.25-99.75mmol/L，氯化钾2.375-2.625 mmol/L，磷酸二氢钾0.333-0.368mmol/L，硫酸镁0.19-0.21mmol/L，葡萄糖3.04-3.36mmol/L，氯化钙1.615-1.785 mmol/L，乳酸钠1.418-1.567g/L，丙酮酸钠0.095-0.105mmol/L，碳酸氢钠23.75-26.25mmol/L，丙氨酰谷氨酰胺0.95-1.05mmol/L，牛磺酸0.38-0.42mmol/L，4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES 2.375-2.625mmol/L，非必需氨基酸0.95-1.05%（v/v），必需氨基酸1.9-2.1%（v/v），维生素0.95-1.05%（v/v），庆大霉素 9.5-10.5mg/L。

所述非必需氨基酸为L-丙氨酸、 L-天冬酰胺、 L-天冬氨酸 、 L-谷氨酸、甘氨酸、 L-脯氨酸、 L-丝氨酸中的一种或者几种。

所述必需氨基酸为L-精氨酸、L-胱氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、苯L-丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸中的一种或者几种。

所述维生素为氯化胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、D-泛酸、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫氨酸中的一种或者几种。

囊胚培养液的溶剂采用超纯水。

本发明所述囊胚培养液中可以选择性加入指示剂为酚红，浓度4.75-5.25mg/L。

本发明囊胚培养液中含有人血清白蛋白9.5-10.5%，v/v，可在使用时添加或分装前添加。

本发明的囊胚培养液的pH=7.20-7.50，渗透压260-290mOsm/Kg。

本发明囊胚培养液的制备方法，包括下面步骤：

（1）基础液的配制

a、先按照比例称量各组分，并分开放置；

b、先将称量好的组分(除杀菌剂、选择性添加指示剂、碳酸氢钠以及人血清白蛋白)溶于超纯水中，溶解过程中遵循先固体后液体，NaHCO₃最后加入的原则；

c、向步骤b所得溶液中加入称量好的杀菌剂、选择性添加指示剂和碳酸氢钠；

d、将配置好的基础液放置37℃、5.5%的CO₂培养箱中平衡6-12小时，此步骤用来调节PH在7.20-7.50范围内；

（2）囊胚培养液的原液配制 

a、将囊胚培养液的基础液在超净工作台下利用0.2μm的滤膜过滤除菌，得到滤液A；

 b、在滤液A中加入人血清白蛋白，震荡或搅拌混合均匀，得到囊胚培养液的原液；或者省略该步骤，将滤液A作为囊胚培养液的原液，医生使用时添加人血清白蛋白；

（3）囊胚培养液原液的处理

在无菌环境下对囊胚培养液原液进行分装封口，得到囊胚培养液，将其放置冰箱或冷库内保存；

（4）囊胚培养液的检测

检测项目是pH值、渗透压、细胞毒性、皮内刺激、致敏、无菌、热原、细菌内毒素、体外鼠胚试验来判断囊胚培养液是否合格。