[发明专利]一种药物刺激性的质谱检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物的刺激性评价的检测方法，具体涉及一种用质谱方法评价药物刺激性的质谱检测方法。

背景技术

中药、天然药物制剂成分复杂。包括活性成分或组分、配伍后产生的新成分、体内代谢物等。这些复杂的物质进入体内容易导致刺激性反应。很多药物，特别是静脉给药的药物，在输液过程中常见血管刺激性反应。此外，舌下含服或者皮肤外用药物也容易因此刺激性。美国纽约药物实践研究表明，几乎4％的住院病人患一种药物治疗的副作用。全美每年的住院病人中，约有100万人发生药物治疗性损害，其中约有18万人死于药物损伤。

在刺激性反应过程中的很多现象如血管反应和通透性改变，实质上主要是由一系列被称作炎症介质的内源性化学因子介导实现的，它们影响到整个炎症过程.其中花生四烯酸的代谢产物在炎症发生时起主要作用被称为促炎反应介质；而脂氧素(Lipoxin，LX)、Resolvin E1等在炎症消退时发挥主要作用被称为抗炎反应介质。这些炎症介质以自分泌、旁分泌、内分泌等作用于局部和全身，以正负反馈方式相互调控，炎症反应的转归将取决于这两大类介质的平衡，任何一方的过度优势均可造成炎症失控，内环境稳定的破坏。

因此，为了指导临床合理用药，应进行中药、天然药物制剂应用的刺激性检验。而对于药物刺激性，有效的检验和检测方法至关重要。关于刺激性评价的局部刺激动物模型研究较少，常规的方法是兔眼刺激试验、动物同体左右侧自身对比法。用药部位根据药物的给药途径确定，可选用耳缘静脉，耳中心动脉(其它动物可选用前、后肢静脉及股动脉等)，股和背部肌肉，侧胸壁皮下组织，静脉旁组织等，采用肉眼观察药物刺激性。但是这个方法不灵敏，当没有红、肿的现象时，就无法观测，而且肉眼观测的指标比较单一，方法主观性较大。为此，我们建立一种更灵敏、更客观的方法用来评价药物刺激性。本发明利用药物刺激细胞或组织，用质谱手段检测近百种炎症因子指标，检测限达到pg-ng/ml级别，通过各炎症因子揭示药物刺激性机制。

发明内容

发明目的：发明目的：本发明所要解决的技术问题是克服现有技术只能对少数炎症因子进行检测，不能全面检测引起药物刺激性的大量炎症介质的不足，从而提供一种具有方便性、全面性、灵敏性的质谱检测方法。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种药物刺激性的质谱检测方法，将药物原液或将药物原液配制成一定浓度的溶液，与细胞共同培养，取细胞上清液，或者将药物注入实验动物体内，取组织液经过提取处理后，然后利用质谱仪，检测药物作用前后炎症物质含量的变化。

作为优选方案，以上所述的药物刺激性的质谱检测方法，其特征在于，将药物原液稀释0.1-100倍，更加优化倍数为10倍。

作为优选方案，以上所述的药物刺激性的质谱检测方法，所述药物原液的浓度为0.01-20mmol/l，更加优化浓度为2.5mmol/l、5mmol/l、10mmol/l。

作为优选方案，以上所述的药物刺激性的质谱检测方法，所述的细胞为巨噬细胞，实验动物为大鼠。

作为优选方案，以上所述的药物刺激性的质谱检测方法，所述的炎症物质为脂类代谢物，所述的脂类代谢物为PGF2α、5s-HpETE、LTB4促炎性物质及PGE1抗炎性物质。

作为优选方案，以上所述的药物刺激性的质谱检测方法，所述的细胞上清液或组织液的处理方法为液-液萃取法、固相萃取、超声提取。优选乙酸乙酯/正己烷(1:1)液-液萃取法。

作为优选方案，以上所述的药物刺激性的质谱检测方法，所述的质谱仪检测的条件优选为流动相A相位：水-乙腈-甲酸体积比为70:30:0.02，流动相B相位：乙腈-异丙醇体积比为50:50；

梯度洗脱程序：

0～3min：25％B；3～11min：45％B；

11～13min：60％B；；13～18min：75％B；

18～18.5min：90％B；20～25min：0％B；

25～30min：0％B。

本发明所述的药物刺激性的质谱检测方法，所述的药物为中药生药、中成药或中药注射液。

本发明所述检测方法，是一种广泛适用于药物刺激性评价的质谱检测方法。

有益效果：本发明提供的药物刺激性的质谱检测方法具有以下优点：