[发明专利]用于同源重组的线性SUMO载体的构建方法有效
| 申请号： | 201410389646.3 | 申请日： | 2014-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN104140976A | 公开（公告）日： | 2014-11-12 |
| 发明（设计）人： | 田方;张涛;徐彬 | 申请（专利权）人： | 天津謙泰生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300380 天*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 同源 重组 线性 sumo 载体 构建 方法 | ||
1.一种用于同源重组的线性SUMO载体的构建方法，其特征是包括如下步骤：
(1)合成SEQ ID NO.1所示的第一合成片段，所述第一合成片段的第439-444的6个核苷酸为限制性内切酶SfoI识别序列，第151-441的291个核苷酸为改进后的第一种SUMO标签的核苷酸序列；
(2)设计带有限制性内切酶识别位点的引物，PCR方法扩增第一合成片段，使第一合成片段两端带有限制性内切酶识别位点，双酶切，回收；
(3)设计带有与步骤(2)相同的限制性内切酶识别位点的引物，PCR方法扩增pET表达载体,得到两端带有限制性内切酶识别位点的T7 promoter、T7 terminator外侧的线性PCR产物，双酶切，回收；
(4)将步骤(2)和步骤(3)回收的产物连接，得到第一种载体前体；用限制性内切酶SfoI消化第一种载体前体，得到用于同源重组的线性SUMO载体。
2.根据权利要求1所述的一种用于同源重组的线性SUMO载体的构建方法，其特征是所述pET表达载体为pET28a、pET28b或pET42a。
3.一种用于同源重组的线性SUMO载体的构建方法，其特征是包括如下步骤：
(1)合成SEQ ID NO.2所示的第二合成片段，所述第二合成片段的第438-443的6个核苷酸为限制性内切酶MscI识别序列，第151-440的290个核苷酸为改进后的第二种SUMO标签的核苷酸序列；
(2)设计带有限制性内切酶识别位点的引物，PCR方法扩增第二合成片段，使第二合成片段两端带有限制性内切酶识别位点，双酶切，回收；
(3)设计带有与步骤(2)相同的限制性内切酶识别位点的引物，PCR方法扩增pET表达载体,得到两端带有限制性内切酶识别位点的T7 promoter、T7 terminator外侧的线性PCR产物，双酶切，回收；
(4)将步骤(2)和步骤(3)回收的产物连接，得到第二种载体前体；用限制性内切酶MscI消化第二种载体前体，得到用于同源重组的线性SUMO载体。
4.根据权利要求3所述的一种用于同源重组的线性SUMO载体的构建方法，其特征是所述pET表达载体为pET28a、pET28b或pET42a。
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