[发明专利]一种SNP分子标记及HRM法进行猪肉DNA溯源法

权利要求书

1.一种用于猪肉DNA溯源的SNP分子标记，其特征在于：SNP分子标记为： 

SNP1：序列如SEQ ID NO.1所示，等位基因突变位点为：A/G； 

SNP2：序列如SEQ ID NO.2所示，等位基因突变位点为：C/T； 

SNP3：序列如SEQ ID NO.3所示，等位基因突变位点为：C/G； 

SNP4：序列如SEQ ID NO.4所示，等位基因突变位点为：A/G 

SNP5：序列如SEQ ID NO.5所示，等位基因突变位点为：C/T 

SNP6：序列如SEQ ID NO.6所示，等位基因突变位点为：A/G 

SNP7：序列如SEQ ID NO.7所示，等位基因突变位点为：A/G 

SNP8：序列如SEQ ID NO.8所示，等位基因突变位点为：A/G 

SNP9：序列如SEQ ID NO.9所示，等位基因突变位点为：A/G 

SNP10：序列如SEQ ID NO.10所示，等位基因突变位点为：A/G 。

2.一种利用HRM法进行猪肉DNA溯源的方法，特征在于：包括如下步骤： 

1)从已发表文献或NCBI中选取SNPs位点，其中，SNPs位点应满足以下要求：A.任意相邻的SNP间的距离≥1Mb，保证SNPs间相互独立，不存在连锁现象；B.任意SNP位点与其他SNP位点不存在任何关联；C.SNP侧翼序列不存在任何变异； 

2)取猪肉、猪血或猪毛发样品≥299个，提取其DNA； 

3)根据选取的SNPs位点，设计引物，利用HRM法对每个样品进行SNPs位点基因型分析；计算出每个单核苷酸多态性SNP的等位基因频率及杂合度； 

4)记录每一样品的SNPs位点信息； 

5)后期，选择的步骤2)中的猪有问题，将有问题的猪肉按照步骤2)到4)的方法，对作为DNA溯源的SNPs位点进行检测； 

6)将步骤5)得到的SNPs位点信息与步骤4)中记录的信息进行对比； 

7)根据溯源标记的SNPs的特征信息追溯猪肉来源。 

3.权利要求2所述的利用HRM法进行猪肉DNA溯源的方法，特征在于：步骤3)中所用引物分别为： 

SNP1：上游引物snp1-f如SEQ ID NO.11所示；下游引物snp1-r如SEQ ID NO.12所示； 

SNP2：上游引物snp2-f如SEQ ID NO.13所示；下游引物snp2-r如SEQ ID NO.14所示； 

SNP3：上游引物snp3-f如SEQ ID NO.15所示；下游引物snp3-r如SEQ ID NO.16所示； 

SNP4：上游引物snp4-f如SEQ ID NO.17所示；下游引物snp4-r如SEQ ID NO.18所示； 

SNP5：上游引物snp5-f如SEQ ID NO.19所示；下游引物snp5-r如SEQ ID NO.20所示； 

SNP6：上游引物snp6-f如SEQ ID NO.21所示；下游引物snp6-r如SEQ ID NO.22所示； 

SNP7：上游引物snp7-f如SEQ ID NO.23所示；下游引物snp7-r如SEQ ID NO.24所示； 

SNP8：上游引物snp8-f如SEQ ID NO.25所示；下游引物snp8-r如SEQ ID NO.26所示； 

SNP9：上游引物snp9-f如SEQ ID NO.27所示；下游引物snp9-r如SEQ ID NO.28所示； 

SNP10：上游引物snp10-f如SEQ ID NO.29所示；下游引物snp10-r如SEQ ID NO.30所示。 

4.权利要求3所述的利用HRM法进行猪肉DNA溯源的方法，特征在于：步骤3)中进行SNPs位点基因型分析时，反应条件为：95℃热启动反应10min；95℃反应10s，touchdown程序20s，72℃反应20s，20s末收集单个荧光，共进行40个循环；95℃反应1min，60℃反应2min，同时收集荧光信号，1个循环；60-95℃读取熔解曲线，20次/℃。