[发明专利]一种SNP分子标记及HRM法进行猪肉DNA溯源法

说明书

技术领域

本发明属于食品技术领域，涉及猪肉DNA溯源的SNP分子标记即单核苷酸多态性标记，具体涉及利用HRM法即高分辨率熔解曲线分析方法进行猪肉DNA溯源的方法。

背景技术

随着人们生活水平的提高，食品的安全性越来越受到人们的关注。肉制品作为人类食物中蛋白质的主要来源，其安全性自然也备受关注，溯源技术越来越成为肉品安全保障和监管的重要手段。

肉类食品溯源的技术方法有很多，如标签溯源技术、虹膜溯源技术和DNA溯源技术等。与其他溯源技术相比，DNA溯源技术具有易分型、便于规模化自动化检测等优点。它不仅可以对活体动物进行溯源，还可以对胴体分割后的每一块肉，甚至是经过加工后的熟肉进行溯源，能够真正的做到从生产到餐桌的全程溯源。可以大大强化政府部门的肉品质量安全监管，提供有用的信息处理食品安全应急事件，将有助于社会的稳定。

DNA溯源技术的产生源于DNA的遗传与变异。它是通过分析特定的DNA分子标记，获得动物个体的DNA指纹图谱从而达到鉴别个体、品种或是物种的目的。本研究选取了第三代分子标记——SNPs标记(单核苷酸多态性标记)。目前，国内外相关的研究中，对于SNPs标记的检测，主要采用两种方法，RFLP-PCR法和TaqMan探针法。但是RFLP-PCR法检测时间长，TaqMan探针法检测费用高的缺点，这成为了DNA溯源技术广泛应用的一个障碍。因此，若能找到一种简单、快捷、低成本的检测方法，来代替这两种检测方法，将有助于DNA溯源技术的大规模推广。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中，猪肉DNA溯源方法操作复杂，检测周期长，成本高等问题，通过HRM法即高分辨率熔解曲线分析方法检测取自猪肉的SNPs分子标记，达到快速准确检测猪肉来源的目的。

本发明的目的通过以下方法获得

本发明提供一种用于猪肉DNA溯源的SNP分子标记，分别为：

SNP1：序列如SEQ ID NO.1所示，等位基因突变位点为：A/G；

SNP2：序列如SEQ ID NO.2所示，等位基因突变位点为：C/T；

SNP3：序列如SEQ ID NO.3所示，等位基因突变位点为：C/G；

SNP4：序列如SEQ ID NO.4所示，等位基因突变位点为：A/G

SNP5：序列如SEQ ID NO.5所示，等位基因突变位点为：C/T

SNP6：序列如SEQ ID NO.6所示，等位基因突变位点为：A/G

SNP7：序列如SEQ ID NO.7所示，等位基因突变位点为：A/G

SNP8：序列如SEQ ID NO.8所示，等位基因突变位点为：A/G

SNP9：序列如SEQ ID NO.9所示，等位基因突变位点为：A/G

SNP10：序列如SEQ ID NO.10所示，等位基因突变位点为：A/G

序列表中的n分别代表各个分子标记的突变位点。

本发明还提供一种利用HRM法进行猪肉DNA溯源的方法，包括如下步骤：

1)从已发表文献或NCBI中选取SNPs位点，其中，SNPs位点应满足以下要求：A.任意相邻的SNP间的距离≥1Mb，保证SNPs间相互独立，不存在连锁现象；B.任意SNP位点与其他SNP位点不存在任何关联；3)SNP侧翼序列不存在任何变异；

2)取猪肉、猪血或猪毛发样品≥299个，提取其DNA；

3)根据选取的SNPs位点，设计引物，利用HRM法对每个样品进行SNPs位点基因型分析；计算出每个单核苷酸多态性SNP的等位基因频率及杂合度；

4)记录每一样品的SNPs位点信息；

5)后期，选择的步骤2)中的猪有问题，将有问题的猪肉按照步骤2)到4)的方法，对作为DNA溯源的SNPs位点进行检测；

6)将步骤5)得到的SNPs位点信息与步骤4)中记录的信息进行对比；

7)根据溯源标记的SNPs的特征信息追溯猪肉来源。