[发明专利]重组腈水解酶、编码基因、突变体、工程菌及应用有效
| 申请号： | 201410394471.5 | 申请日： | 2014-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN104212784B | 公开（公告）日： | 2017-06-23 |
| 发明（设计）人： | 郑裕国;柳志强;张新红;薛亚平;徐喆;贾东旭;沈寅初 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/78 | 分类号： | C12N9/78;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/00 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司33201 | 代理人： | 黄美娟,李世玉 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 水解 编码 基因 突变体 工程 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种重组腈水解酶的突变体，其特征在于所述突变体是将重组腈水解酶168位的F突变为V，并且在蛋白质C端加入组氨酸标签，获得重组腈水解酶的突变体；所述重组腈水解酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示。
2.一种由权利要求1所述突变体构建的重组载体。
3.一种由权利要求2所述重组载体转化的重组基因工程菌。
4.一种权利要求1所述重组腈水解酶突变体在制备1-氰基环己基乙酸中的应用，其特征在于所述的应用为：将含有重组腈水解酶突变体编码基因的重组基因工程菌经发酵培养后的发酵液离心，以湿菌体或湿菌体分离纯化后的酶作为催化剂，以1-氰基环己基乙腈为底物，以pH值为3.0～10.0的100mM磷酸盐缓冲液为反应介质，在25～70℃转化反应，反应结束后，获得含1-氰基环己基乙酸的混合液，将混合液分离纯化，获得1-氰基环己基乙酸；所述底物初始浓度为0.02～1mol/L，所述湿菌体的质量终浓度为10～100g/L，所述酶的质量终浓度为20～40mg/L。
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